纳米氢氧化钙根管充填材料对乳牙根管治疗安全性研究.docVIP

纳米氢氧化钙根管充填材料对乳牙根管治疗安全性研究 　　【摘要】 目的 研究纳米氢氧化钙材料应用于乳牙根管充填治疗的安全性。方法 实验分为三组， 实验组为纳米氢氧化钙根充材料浸提液， 阴性对照组为0.9%氯化钠溶液， 阳性对照组为蒸馏水， 各10 ml， 在体外加入0.2ml的新鲜稀释的抗凝儿童血液， 检测三组实验对象的吸光光度值， 计算溶血率。结果 溶血率为 3.96%（ 　　【关键词】 溶血率；乳牙根管充填；纳米氢氧化钙 　　在儿童混合牙列阶段， 乳牙牙根的生理性吸收会使乳牙根管充填材料完全暴露于牙周组织， 并与牙周组织和新萌出的恒牙密切接触， 因此根管内充填材料需要具备较高的生物安全性， 作者已经证实了纳米氢氧化钙根充材料的急性全身毒性反应较低、细胞毒性反应较小， 生物安全性较好。 　　溶血实验是细胞毒性评价的的一个补充实验， 它通过检测长期与骨和软组织接触的医用生物材料在体外的急性溶血反应， 定性、定量地评估红细胞的溶解、破坏和血红蛋白的游离程度， 对生物材料的血液相容性进行评估， 是目前临床应用前粗筛的标志性体外试验， 具有操作安全、高效、精确、实用等优点， 目前被认为是金标准。本实验旨在通过溶血实验测定纳米氢氧化钙根充材料与儿童血液的相容性， 为儿童根管充填材料的临床应用提供理论基础。 　　1 材料与方法 　　1. 1 试剂 生理盐水、蒸馏水、抗凝试管（美国）。 　　1. 2 试验仪器 岛津UV-260型紫外-可见光光分度计（日本岛津）、W21Cr600型电热恒温水温箱（无锡精密仪器制造厂）、离心机（北京医用离心机厂）、电子秤（上海精科实业有限公司）。 　　1. 3 分组 阴性对照组：生理盐水10 ml， 3管；实验组：浸提液的提取：将纳米氢氧化钙根管充填材料放置于100%湿度、37℃的恒温箱中固化24 h后， 研磨成粉末状， 称取粉末2.0 g， 按照2.0 g/10 ml的比例配制成浸提液， 并在高温、高压、121℃的条件下浸提1 h， 3管；阳性对照组：蒸馏水10 ml， 3管。 　　1. 4 实验步骤 ①新鲜儿童稀释血液制备[1]：0.5 ml， 检测血红蛋白的含量， 将其加入到2～3 ml生理盐水中， 将血红蛋白含量稀释为（1.25±0.125）mg/ml、混匀、放入（4±2）℃的??箱中待用。②将3组试管放在37℃的恒温水浴箱中温育半小时后， 加入新鲜稀释的抗凝儿童血液0.2 ml；③轻轻混匀后再放置于37℃的恒温水浴箱中温育1小时；④离心：转速800转/min， 5 min；⑤检测：将波长设定为545 nm， 分别取各管上清液200 ul、取3次， 用比色杯测定各管的吸光度值， 将检测各管3次吸光光度值的平均值作为每管的OD值[2]。 　　1. 5 结果计算及判断标准[2] 溶血率（%）=Dr-Dnc / Dpc-Dnc×100%公式中Dr代表实验组的吸光度值， Dnc代表阴性对照组的吸光度值， Dpc代表阳性对照组的吸光度值。溶血率5%， 表明材料血液相容性差。溶血率≤5%， 表明材料血 　　3 讨论 　　本实验采用纳米氢氧化钙根充材料的浸提液与儿童新鲜稀释血液在体外模拟体内环境进行溶血实验， 检测纳米氢氧化钙根充材料的血液相容性。 　　口腔医学生物材料在应用于临床前必须通过一系列的生物安全性能的检测， 目前纳米氢氧化钙根充材料已经通过了急性全身毒性实验、细胞毒性实验[3， 4]。由于纳米氢氧化钙是一种无定形、白色粉末状的高分子物质， 微结构为条块状， 其粒径较小、比表面积大， 生物活性较强， 能穿透机体的多种生物屏障而对机体组织产生影响， 通常这种高分子物质通过材料表面机械损伤的物理作用和材料可溶性残余分子的化学作用引起红细胞中的蛋白质、脂质的含量和生物特性发生变化， 导致红细胞的完整性遭到破坏而出现非渗透性溶血， 从而对机体造成不可修复性损伤[5， 6]。因此检测该材料的血液相容性是十分必要的， 溶血实验是细胞毒性评价的的一个补充实验， 它通过检测长期与骨和软组织接触的医用生物材料在体外的急性溶血反应， 来判定生物材料能否应用于临床， 目前溶血试验被认为是金标准， 具有安全、快速、准确、实用等优点[4]。溶血试验的基本原理：医学生物材料或浸提液与血液直接接触时， 材料的物理、化学特性、材料的外表结构、组成成分等可能会引起红细胞的溶解、破坏从而导致血红蛋白的释放， 造成游离的血浆、血红蛋白增加， 对机体产生毒副作用， 使机体组织遭到破坏。体外检测红细胞的溶解和血红蛋白游离的程度， 对医学生物材料的血液相容性进行评价。所有物质在光谱分析中均有特定的吸收光谱， 因此用分光光度仪检测材料的吸光光度值， 并准确地进行定性、定量分析， 精确计算材料的溶血率来准确、客观评价材料对机体的