238散发性结直肠癌错配修复蛋白表达分析及其临床意义.docVIP

238散发性结直肠癌错配修复蛋白表达分析及其临床意义 　　摘要：目的 分析错配修复蛋白MLH1、MSH2、MSH6和PMS2在结直肠癌中的表达规律及临床意义。方法 选取2009年1月～2013年10月经病理学确诊的散发性结直肠癌手术切除标本238例，所有患者在术前均未接受过放疗或化疗。免疫组织化学（Envision法）检测MLH1、MSH2、MSH6和PMS2蛋白表达情况。结果 散发性结直肠癌组织中错配修复蛋白的缺失率16.8%（40/238），与肿瘤的分化、发病年龄、性别方面均无相关性（r值均在-0.1～0.1）。MSH2与MSH6蛋白缺失有相关性（r=0.71），MLH1和PMS2蛋白的缺失率有相关性（r=0.70），MLH1与MSH2、MSH6蛋白缺失无相关性（r=-0.03、r=-0.01），PMS2与MSH2、MSH6蛋白缺失无相关性（r=-0.008、r=-0.02）。错配修复蛋白缺失组与无缺失组在肿瘤的分化、发病年龄、性别方面均无差异性（P0.05）。结论 在散发性结直肠癌组织中错配修复蛋白MLH1、MSH2、MSH6和PMS2缺失与肿瘤的分化、发病年龄、性别方面均无相关性。MSH2与MSH6蛋白缺失有相关性，MLH1和PMS2蛋白的缺失率有相关性。 　　关键词：散发性结直肠癌；错配修复蛋白；免疫组织化学 　　结直肠癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一。其发生发展涉及到一系列遗传学改变。已有大量的研究证实，微卫星不稳定性（MSI）存在于遗传性非息肉性结直肠癌（HNPCC），部分散发性结直肠癌（SCRC）胃癌等当中，MSI是错配修复基因的异常造成的。错配修复系统是遗传不稳定性的守护者，具有识别和修复DNA合成期间的错配碱基的功能[1]。通常由错配修复基因 MLH1、MSH2、MSH6 和 PMS2 编码的错配修复蛋白修正这类错误[2]。有研究报道，细胞系中错配修复蛋白缺陷与化疗剂的抵制有相关性。MSI阳性肿瘤的预后和化疗敏感性与MSI阴性病例不同，通过检测表型为治疗和预后提供依据[3]。 　　1资料与方法 　　1.1一般资料 选取2009年1月～2013年10月经病理学确诊的散发性结直肠癌手术切除标本238例，所有患者在术前均未接受过放疗或化疗。其中男性125例，女性113例；年龄26～85岁，平均年龄（64.7±12.0）岁，中位年龄66岁；高分化腺癌7例，中分化腺癌197例，低分化腺癌34例。 　　1.2方法 鼠抗人MLH1、MSH2、MSH6 和 PMS2的单克隆抗体及免疫组织化学染色Envision法试剂盒为Dako公司产品。购自福州迈新生物技术有限公司。 　　所有标本经10%福尔马林溶液固定，石蜡包埋，4 μm连续切片，贴于经APES处理的载玻片上，分别进行HE染色和免疫组织化学染色。用已知阳性标本切片做阳性对照，PBS代替一抗做阴性对照。 　　1.3结果判定 每张切片选择有代表性的区域，并避开切片周边区域，光镜下随机观察5个高倍镜视野。参照Friedrichs等[4]免疫组化评判标准，染色深浅需与背景染色相对比，分别对染色强度进行计分。染色强度计分：无色为 0 分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。0分与0.05）。由于错配修复蛋白缺失组中，高分化肿瘤之占4例，病例数较少，不宜做χ2检验，但是肿瘤的分化的相关系数r=0.013，可以判定错配修复蛋白缺失与肿瘤分化没有相关性，见表1。 　　3讨论 　　近年的研究发现微卫星不稳定（MSI）为结直肠癌发病的另一重要机制，是遗传性非息肉病性结直肠癌（hereditary non-polyposis colorectal cancer HNPCC）及部分散发性结直肠癌发生的重要原因。目前关于微卫星不稳定的研究不仅仅局限于发病机制上，其与结直肠癌预后的关系也密切相关。错配修复基因功能异常使其不能产生正常的具有纠正错配功能的缺陷性蛋白质，而导致微卫星不稳定。散发性MSI结直肠癌常由于MMR基因的甲基化导致错配修复蛋白不表达从而使DNA复制错误增加、微卫星不稳定而使肿瘤发生。由于MLH1、PMS2、MSH2、MSH6表达的减少预示着肿瘤细胞处于微卫星不稳定状态[5]，对这四项指标进行检测，对微卫星不稳定性的检测的吻合率达99%。 　　从已经发表的数据来看，各个研究小组间对错配修复蛋白的缺失率、与肿瘤的分化、发病年龄、以及不同蛋白间的不同相关性的研究结果不尽一致。通过本实验的数据统计分析来看，散发性结直肠癌组织中错配修复蛋白的缺失率为16.8%（40/238），与肿瘤的分化、发病年龄、性别方面均无相关性（r值均在-0.1～0.1）。 　　人类错配修复系统对碱基的识别遵守甲基导向机制，也是利用DNA两条链甲基化状态的差异，识别含错配的子链。人类