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TR注射液对血小板聚集影响体外研究 　　【摘 要】目的：TR注射液为具有消除氧自由基作用的脑神经保护剂。本试验采用5种血小板聚集诱导剂，测定TR注射液体外对兔血小板聚集的影响，为其进一步开发和临床应用提供参考依据。方法：采用体外血小板聚集试验，观察TR注射液对五种血小板聚集诱导剂二磷酸腺苷（ADP）、血小板活化因子（PAF）、花生四烯酸钠盐（AA）、凝血酶（T）和胶原诱导的兔血小板聚集的影响。采用ADP、PAF、AA和T作为聚集剂，TR终浓度分别为396、198和99?g/ml。采用胶原作为聚集剂，TR终浓度分别为198、99、49.5、24.8和12.4?g/ml。ADP、PAF、AA和胶原聚集剂阳性对照选用维拉帕米。凝血酶聚集剂的阳性对照选用肝素钠。结果：TR终浓度高达396?g/ml对凝血酶诱导的血小板聚集完全没有影响。终浓度198?g/ml对ADP、PAF和AA诱导的血小板聚集没有抑制作用。对胶原诱导的血小板聚集，TR终浓度在49.5?g/ml不产生抑制作用。结论：TR注射液对五种血小板聚集诱导剂诱导的兔血小板聚集无抑制作用。 　　【关键词】TR注射液；血小板聚集 　　【中图分类号】R284 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2012）13-0144-02 　　TR注射液为具有消除氧自由基作用的脑神经保护剂，临床拟用于治疗中风。它以已上市的脑神经保护药依达拉奉（Edaravone）作为先导化合物，运用me-too/me better新药开发策略，基于依达拉奉结构进行合理药物设计，设计目的在于提高此类化合物消除氧自由基能力。经合成和体内外药效筛选发现新衍生物TR，其化学名2-甲基-5-亚胺-5H-苯并[d]吡唑[5，1-b] [1，3]?嗪，有希望开发成为具有自主知识产权，疗效突出，不良反应低的新一代脑神经保护药。本实验采用体外血小板聚集试验，观察TR注射液对五种血小板聚集诱导剂二磷酸腺苷（ADP）、血小板活化因子（PAF）、花生四烯酸钠盐（AA）、凝血酶（T）和胶原诱导的兔血小板聚集的影响，为其进一步开发和临床应用提供参考依据。 　　1材料与方法 　　1.1药品及试剂 　　TR注射液，由南京中瑞药业有限公司提供；批号：100802；规格：150ml（250ml输液瓶装）；含量：19.8mg/ml；性状：淡黄色澄明液体；保存条件：室温避光；配制方法：试验前用TR空白对照液稀释??制。 　　TR空白对照液，由南京中瑞药业有限公司提供；批号：100801；规格：300ml（500ml输液瓶装）；性状：无色澄明液体；保存条件：室温避光。 　　腺嘌呤核苷二磷酸单钠盐（ADP），上海华舜生物工程有限公司，进口分装，批号：Ameresco0160。将ADP用生理盐水配成100mM母液，实验前用生理盐水稀释成0.5mM，取7?l加入总量350?l富血小板血浆（PRP）中，终浓度为10μM。 　　血小板活化因子（PAF）：Sigma产品，批号17K1566。临用前用生理盐水配制成10?g/ml，取7?l加入总量350?l富血小板血浆（PRP）中，终浓度为0.2?g/ml。 　　花生四烯酸钠盐（AA），Sigma产品，批号098K5204。临用前用生理盐水配制成5mg/ml，取7?l加入总量350?l富血小板血浆（PRP）中，终浓度为100?g/ml。 　　凝血酶（T），Sigma产品，批号105K7700。临用前用生理盐水配制成67U/ml，取7?l加入总量350?l富血小板血浆（PRP）中，终浓度为1.34U/ml。 　　胶原（Collagen，Col），自制。取大鼠腹部皮肤，去毛、皮下脂肪，生理盐水冲洗皮肤后吸去多余水分，剪碎皮肤，加生理盐水，玻璃匀浆器匀浆，3000r?min-1离心10min，取上清。保存4℃备用。取20?l加入总量350?l富血小板血浆（PRP）中，终浓度为20mg/ml。 　　肝素钠注射液，规格2 ml∶12500U，批号100729，常州千红生化制药股份有限公司产品。临用前配制成1.25U/ml，取7?l加入总量350?l富血小板血浆（PRP）中，终浓度为0.025U/ml。 　　维拉帕米注射液，规格2 ml∶5 mg，批号090901，上海禾丰制药有限公司。实验时取原液7?l加入总量350?l富血小板血浆（PRP）中，终浓度为50mg/ml。 　　柠檬酸三钠，批号国药集团化学试剂有限公司。 　　水合氯醛，批国药集团化学试剂有限公司。 　　生理盐水，即氯化钠注射液，规格500ml∶4.5g，批扬州中宝制药有限公司。 　　1.2 仪器设备 　　低速自动平衡离心机，型号LD25-2，北京医用离心机厂。 　　血小板聚集仪，型号540V