HPLC测定小儿热速清口服液中黄芩苷的含量.docVIP

HPLC法测定小儿热速清口服液中黄芩苷的含量 崔明辉 （广州中医药大学 08制药工程 2008033134,广东 广州 510006） 【名称】小儿热速清口服液 【处方】柴胡、黄芩、板蓝根、葛根、金银花、水牛角、连翘、大黄。 【制法】以上八味，将柴胡、金银花、连翘提取挥发油,蒸馏后的水溶液另器收集；水牛角加水先煎煮3小时后，再与蒸馏后的药渣及黄芩等四味加水共煎煮二次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩，待冷至室温，加乙醇使含醇量为65％，搅匀，静止后，取上清液回收乙醇，浓缩至相对密度为1.10～1.15（90～95℃），浓缩液再与挥发油合并，加入矫味剂，调节PH值至规定范围，再加水至1000ml，搅匀，静置，滤过，灌装，灭菌，即得。 【性状】为红棕色澄清液体；气香、味甜、微苦。 【含量测定】黄芩是处方中的君药，其中的有效成分黄酮类化合物之一黄芩苷具有多种生物活性，现代药理研究表明其具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抗HIV等作用和治疗糖屎病慢性并发症和银屑病等。为了有效控制制剂的质量，采用HPLC法测定了小儿热速清颗粒中主要有效成分黄芩苷的含量，现将结果报道如下。 仪器和材料 1100LC高效液相色谱仪(美国Agilent公司，DAD检测器)；KQ-250B超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；SZ-93自动双重水蒸馏器(上海亚荣生化仪器厂)。小儿热速清口服液(吉林一正药业集团有限公司、哈尔滨圣泰制药股份有限公司)；黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号110715—200212)。甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其它试剂均为分析纯。 （2）实验条件的选择 色谱柱：Agilent zorbax SB-C18柱 流动相：甲醇一水一磷酸(45：55：0．2） 流量：1.0mL/min 检测波长：276nm 进样量10μL。 方法和结果 1）色谱条件 理论塔板数按黄芩苷峰计算不低于2500，与其它峰的分离度均大于1.5。 2）对照品溶液的制备 取黄芩苷对照品约10mg，精密称定，置200ml量瓶中，加50%甲醇适量，置热水浴中振摇使溶解，放冷，加50%甲醇至刻度，摇匀，即得（每1ml含黄芩苷50μg） 3）供试品溶液的制备 精密量取本品1ml，置100ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，即得。 定量 分别精密吸取对照品溶液5μL与供试品溶液10μL，注入液相色谱仪，测定，根据下式计算： 式中： Ai----- 样品溶液中黄芩苷组分的峰面积 (Ci)s ------ 标准溶液中黄芩苷组分的量 (Ai)s ------ 标准溶液中黄芩苷组分的峰面积 线性关系考察 精密量取黄芩苷对照品储备液0.05、0.50、2.50、5.00、7.50、10.00mL，分别置10mL容量瓶中，加入50％甲醇稀释至刻度，浓度分别为0.5、5、25、50、75、100μg/mL，摇匀，即得对照品溶液。按照上述色谱条件进样。以浓度C为横坐标，峰面积A为纵坐标，求得黄芩苷标准溶液的线性回归方程为A=26.042C-1.3617，r=0.9999(n=6)，黄芩苷在0.5～100μg·mL 范围内呈良好的线性关系。 精密度试验 取黄芩苷对照品溶液(50μg/mL)，进样量10μL，重复测定6次，得黄芩苷对照品峰面积的RSD为0.99％ ，表明仪器精密度良好。 7）稳定性试验 取同一批号的小儿热速清颗粒样品溶液(批号按供试品溶液的制备方法制备，分别在0、2、4、6、8 h进样，测定黄芩苷峰面积RSD为1．20%，结果表明在测定条件下，样品中黄芩苷于10 h内测定结果稳定。结果见表1。 表1 稳定性试验结果 间隔时间/h 黄芩苷峰面积 平均峰面积 RSD/% 0 176083 177919 0.76 2 177579 4 178650 6 177603 8 179681 由上表可知，供试品和方法的稳定性良好。 重复性试验 取同一批号的小儿热速清口服液，按供试品溶液的制备方法制备，重复进样6次，测得峰面积RSD为，结果如表2，表明本方法重现性良好。 表2 方法的重复性测定 序号 取样量/支 黄芩苷峰面积 平均峰面积 RSD/% 1 1 176088 177474 0.68 2 1 177588 3 1 178610 4 1 175980 5 1 178800 6 1 177778 9）加样回收率试验 精密移取0.5ml小儿热速清口服液，按低、中、高浓度分别加入定量的对照品溶液（50μg/mL）0.5mL、1mL、1.5mL，40%乙醇定容至10mL，制备成加样回收率供试品，并依法测定，结果见表3。 表3 回收率的测定