免疫法粪便潜血试验用指引.docVIP

免疫法糞便潛血試驗使用指引 1.背景介紹： 糞便潛血試驗於臨床上是用於檢測腸胃道疾病出血，如：消化性潰瘍、腸道發炎、大腸瘜肉和大腸直腸癌等。美國癌症協會也建議：五十歲以上之成人應每年做一次糞便潛血篩檢，以期能早期發現大腸瘜肉或腫瘤；依文獻之研究報告，進行糞便潛血篩檢，可以降低大腸直腸癌的發生率或死亡率。1,2,3 糞便潛血試驗依反應原理可分為化學法與免疫法，其中，化學法因為是利用血紅素中之部分結構Heme具有過氧化酶的活性，而使氧化還原反應進行，缺乏對人類血液之專一性，因此採集檢體前三天開始即必須限制某些食物（如紅肉、動物血及含過氧化酶的蔬菜）、非類固醇消炎藥物及鐵劑的攝取，以減少偽陽性反應；另外，維生素C之攝取則可能會造成偽陰性的結果。 糞便潛血免疫法則是利用針對人體血紅素反應的抗血清或抗體進行抗原抗體反應，因此專一性高，不會受到食物過氧化酶、動物血和維他命C影響，並且有較高的敏感度，適合對糞便中低濃度的潛血檢測；然而，因為是抗原抗體反應，所以要特別注意檢體的保存（也就是備有檢體保存液），以免血紅素受糞便中細菌破壞而導致偽陰性結果；另外，也要注意定量採檢，以避免抗原（血紅素）過多而導致反應偽陰性（Hook effect）。化學法檢測原理，因不受血紅素抗原性被細菌破壞的影响，適合檢測上消化道出血。 2.原理： 2.1免疫層析法（immunochromatographic assay; ICA）： 2.1.1陽性反應： 試劑條上有老鼠抗人類血紅素抗體（anti-hHb），檢體中若有人類血紅素，會與附著有anti-hHb的顏色膠粒形成結合物，結合物泳動至Test觀察窗，與Test觀察窗內的anti-hHb二次抗體結合而呈現色帶，此為陽性反應，多餘的anti-hHb繼續泳動至Control觀察窗，與觀察窗的Anti-mouse IgG非特異抗體結合而呈現色帶，此為滴入合適檢體量與反應膜內進行液體正常毛細作用的品管參考。 2.1.2陰性反應： 假使檢體中沒有人類血紅素，就沒有結合物與anti-hHb二次抗體結合，Test觀察窗就不會出現色帶，此為陰性反應，但anti-hHb仍會泳動至Control觀察窗，與觀察窗內的Anti-mouse IgG結合而呈現色帶 2.2 乳膠粒子凝集法（Latex agglutination method） 將聚苯乙烯（polystyrene）乳膠顆粒以人類紅血球抗體調製成的敏感化乳膠溶液，將此敏感化乳膠溶液與檢體在比色管中混合反應，若檢體中具有人類血紅素，則會與敏感化乳膠溶液形成抗原抗體反應，產生乳膠凝集反應。此方法常用於定量測定，由已知濃度標準液的標準曲線，再經由檢體反應管測光(主波長為660nm)，即可依吸光度對照標準曲線求得血紅素量。 2.3 金膠粒免疫比色法（Colloidal gold colorimetry） 金膠粒試劑中的金膠粒表面包覆著抗人類血紅素單株抗體（Anti-human Hb monoclonal antibody），此粒子可和糞便中的人類血紅素相結合而產生凝集反應，使金膠粒的顏色由原來的酒紅色轉變為藍灰色。顏色的改變可用肉眼判定（定性法），亦可使用儀器自動偵測吸光度的變化（定量法）。可用的儀器包括專用的分析儀和一般生化分析儀，主波長為540nm。 2.4免疫血球凝集法（Immunological hemagglutination） 免疫血球凝集法測試原理是以俱人類血紅素抗原專一性的抗體連結在雞的紅血球作為檢驗試劑，與所要檢測之糞便潛血中人類血紅素成分結合後產生明顯可見的凝集反應。 3.試劑選擇： 3.1所需的設備與試劑 3.1.1定性法： 3.1.1.1不需使用儀器。 3.1.1.2試劑：使用市售的試劑套組（kit），使用前應詳讀廠商的試劑說明書。 3.1.1.3保存條件、保存溫度與保存期限依廠商指示。 3.1.2定量法： 3.1.2.1需使用專用的分析儀或一般生化分析儀。市面上主要有二種廠牌的專用分析儀： a. Eiken（日本）：OC-Sensor μ; 試藥無法上一般生化分析儀。 b. Wako（日本）：JIA-HB2010；試藥可以上一般生化分析儀。 3.1.2.2試劑：使用市售的試劑套組（kit），使用前應詳讀廠商的試劑說明書和儀器操作說明書。 3.1.2.3保存條件、保存溫度與保存期限依廠商指示 4.檢體採集與保存： 4.1原始檢體 免疫法糞便潛血試驗的檢體採集相當重要，不正確的檢體採集無法得到正確的檢驗結果，採集糞便時應注意下列事項： 4.1.1受檢者不須特別限制食物，有痔瘡便秘出血、血尿或月經期間不適合做此檢驗。 4.1.2酒精及一些藥物如spirin,