脂肪酶酶活测定方法.DOCVIP

附录A (规范性附录) 脂肪酶酶活测定方法 原理 碱性脂肪酶可将甘油酯（油、脂）水解，在不同阶段可释放出脂肪酸、甘油二酯、甘油单酯及甘油。水解生成的脂肪酸，可以用标准的碱溶液滴定，以滴定值表示酶活力。 反应式为：RCOOH+NaOH RCOONa+H2O 适用范围 本规定仅适用于脂肪酶对油脂水解活性测定方法。 用语定义 酶活 在一定条件下（温度36℃和pH9.4），水解甘油三酯每分钟生成1μmol脂肪酸的酶量，即为一个国际单位，以u/ml或者u/g表示。 基质 被酶水解的物质，又称为底物。 试剂 A.4.1 0.05 mol/LGly-NaOH缓冲液（pH9.4） A液：0.2 mol/L NaOH，称取NaOH（A.R）8.0 g，用蒸馏水定容至1000 ml； B液：0.2 mol/L Gly，称取甘氨酸15.014 g，用蒸馏水定容1000 ml； 使用前取A液16.8 ml + B液50 ml，加部分蒸馏水稀释，再用酸度计调节pH至9.4，定容到200 ml。 A.4.2 橄榄油 分析纯。 A.4.3 4%聚乙烯醇（PVA）溶液 称取聚乙烯醇40 g（聚合度1750+50），加1000 ml 0.05 mol/L pH 9.4Gly - NaOH缓冲液，沸水浴完全溶解后，冷却，必要时过滤，溶解过程中蒸发的水分要用蒸馏水补充，定容至1000 ml。 A.