红茶茶水细菌数目与时间关系初探.doc

PAGE \* MERGEFORMAT4 红茶茶水内的细菌数量与时间的关系初探 李超，张韬，董志会，曹杨，杨龙 （石河子大学生命科学学院，08级生物技术，新疆 石河子） 摘要：如茶水搁置过夜，容易被病原性细菌污染，也易导致茶水中的成分发生变化；同时茶叶中的咖啡因积聚过多，对人体会产生刺激作用。因此，隔夜茶可能会引起胃肠疾病、消化不良等症。一般来说，茶水浸泡时间越长，微生物污染成度越高。本探究实验将茶水看作液体培养基利用平板菌落计数技术，来探究红茶茶水内细菌的数量与时间的关系。固体培养基采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，因此此测定值为一种近似值。 关键词：红茶、茶水、微生物、细菌、隔夜茶、变质 茶叶的化学成分是由3.5%～7.0%的无机物和93%～96.5%的有机物组成。茶叶中的无机矿质元素约有27种，包括磷、钾、硫、镁、锰、氟、铝、钙、钠、铁、铜、锌、硒等多种。茶叶中的有机化合物主要有蛋白质、脂质、碳水化合物、氨基酸、生物碱、茶多酚、有机酸、色素、香气成分、维生素、皂苷、甾醇等。茶叶中含有20～30%的叶蛋白，与一般食物相比，茶叶中的蛋白质含量是相当高的。最新的资料报道，茶叶中的碳水化合物含量多在40%左右，某些茶叶高达60%以上，茶叶中的碳水化合物多为多糖类。如茶水搁置过夜，容易被病原性细菌污染，也易导致茶水中的成分发生变化；同时茶叶中的咖啡因积聚过多，对人体会产生刺激作用。因此，隔夜茶可能会引起胃肠疾病、消化不良等症。一般来说，茶水浸泡时间越长，微生物污染成度越高。 本实验将茶水看作液体培养基利用平板菌落计数技术，来探究红茶茶水内细菌的数量与时间的关系。固体培养基采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，因此此测定值为一种近似值。 材料与方法： 红茶茶水来源与接种 红茶的来源是在市面的茶叶专卖店得来的，茶水在敞口的烧杯中浸泡，并放置在有人经常生活的室内，进行自然接种。具体方法为：每天上午十二点用开水浸泡一次茶水，茶叶的质量为1.00g，所用水的体积为250ml，并做好标记，置于室内，连续浸泡六天。六天后取出茶水进行平板菌落计数。 消毒与灭菌 本实验采用高压蒸???灭菌方法： 将3个三角瓶（盛有牛肉膏蛋白胨琼脂培养基）、12支1ml吸管、26个培养皿、7支试管（盛有9ml水）等进行高压蒸汽灭菌。 ①灭菌前的准备：将高压蒸汽锅的内桶取出，向外锅内加入适量的水，使水与搁架相偏平，将内桶放入； ②装放待灭菌物品：将已包扎好的物品放入内桶中，应注意不要装的过挤，以免妨碍蒸汽流通而影响灭菌效果，容器口端也不要与内桶壁接触，以免冷凝水浸润包纸口而渗透入所灭菌的培养基中。盖上锅盖，以两两对称方式同时旋紧螺栓，勿使漏气； ③加热排气：接通热源，同时打开气阀，待见有大量水汽排出时，维持3-5分钟，锅内空气排尽，关上排气阀； ④升温保压：继续加热至压力表指针达到灭菌所需压力时计时，并控制热源维持压力至所需的时间（压力为1.05kg/cm2 ,121.3℃，30min）； ⑤出锅：隔断热源，自然降温，待压力表指针回零，打开排气阀，稍等一段时间，再开盖取物，将物品放置在干燥处备用。 培养基的制备 实验中所用固体培养基为牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，该培养基适于腐生细菌的生长，因此平板菌落计数为茶水内的近似值。 ① 培养基的组成及所需量： 药品牛肉膏蛋白胨NaCl琼脂水PH所需量3g10g5g18-20g1000mL7.0-7.2② 溶化：将已经称好的药品依次放入融化容器内在电炉上加热促溶，待其他药品已溶，可将琼脂放入溶化，并不时搅拌，待药品已完全溶化，补充溶化过程中蒸发的水分至所需培养基的总体积，搅拌均匀； ③ 调节PH：用玻璃棒沾取少许培养基，以PH试纸检测培养基的PH，并用0.1mol/L的NaOH溶液调整； ④ 将调整好的培养基趁热转入三角瓶内，放入高压锅内进行高压蒸汽灭菌（压力为1.05kg/cm2 ,121.3℃，30min）。灭菌完毕冷却至凝固状态，放入冰箱内备用。 1.4 分装及平板接种、培养 ① 将备用的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基放入高压锅内融化； ② 用6只灭菌吸管分别吸取6组烧杯中茶水1mL，注入六只盛有9ml无菌水的试管中，做好标记； ③ 再用上一步骤中的六只吸管一一对应吸取1ml茶水注入培养皿中，每组共做两个平板培养基，做好标记； ④ 另取六只经过灭菌的吸管，分别吸取浓度为10-1的茶水注入培养皿中，每组仍然做两个培养基，再取两个空的灭菌培养皿，取一只未用吸管分别注入1mL无菌水作空白对照，做好标记； ⑤ 每个平皿分别倾注约15mL已溶化并冷却到45℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，并立即在桌上作平面旋摇，使水样与培养基充分混匀； ⑦ 培养基凝固后，倒置于37℃保温箱中，培养24h，进行菌落计数。（两个平板