菜花中DNA的提取.docVIP

菜花中DNA的提取 一.实验原理 1．核酸分离提取的原则 1）应保证核酸一级结构的完整性 2）排除其他分子的污染 A． 核酸样品中不应存在对其有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子 B．其他生物大分子如：蛋白质，多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度排除其他核酸分子的污染（如：提取DNA分子应除去RNA；反之亦然） 2. 核酸提取的步骤 1）破碎细胞（材料不同，方法不同） 匀浆器，捣碎器，溶菌酶消化，碱裂解等。 2） 除杂质，提DNA 杂质：蛋白，多糖，脂类，DNase, RNase A. DNase的抑制 DNase需Mg2+,Ca2+激活，所以提取时加0.01M EDTA或EDTA钠盐。（螯合金属离子） 加去垢剂或变性剂（SDS），可使DNase变性失活 B.? 除RNA 酶法：加RNase 调节pH：RNA能在室温条件下被稀碱水解成核甘酸而DNA对碱较稳定（核酸的理化性质），所以提DNA一般要在偏碱的环境中提取，提RNA要在偏酸的环境中稳定。 调节盐浓度(盐的分步沉淀)：在浓NaCl（1－2M）溶液中，DNA溶解度大，RNA溶解度小；在稀NaCl（0.14M）中，DNA溶解度小，RNA溶解度大，因此可利用不同浓度的NaCl溶液将DNA和RNA从样品中分开。 C. 除蛋白 加去垢剂或变性剂（SDS，十二烷基硫酸锂LDS，十二烷基肌酸钠，脱氧胆酸钠）使蛋