tgf-β1通过mir-155调控tp53inp1对肝癌细胞上皮间质转化及肝癌干细胞获得的作用及机制研究-tgf - β 1 regulates t p53 inp1 through mir - 155 and its effect on epithelial-mesenchymal transformation of liver cancer cells and the acquisition of liver cancer stem c.docx

参考文献55全文总结57文献综述58致谢68硕士在读期间发表的论文69英汉缩略语名词对照英文缩写英文全称中文全称bFGFbasicfibroblastgrowthfactor碱性成纤维细胞生长因子CSCscancerstemcells肿瘤干细胞ddH2ODoubledistilledwate双蒸水DMEMDulbeccosmodifiedEaglesmediumDulbecco改良的Eagle培养基EGFepidermalgrowthfactor表皮生长因子HRPHorseradishperoxidase辣根过氧化物酶ngnanogram纳克nmnanometer纳米mRNAmessengerRNA信使RNAOct4octamer-bindingtransciptionfactor4PAGEPolyacrylamidegelelectrophoresis八聚体结合转录因子4聚丙烯酰胺凝胶电泳PBSPhosphatebuffersaline磷酸盐缓冲液PCRpolymerasechainreaction聚合酶链反应PVDFPolyvinylidenedifluoride聚偏氟乙烯膜Rnaseribonuclease核糖核酸酶SDSSodiumdodecylsulfate十二烷基硫酸钠TrisTris(hydroxymethyl)aminonethane三羟甲基氨基甲烷μlmicroliter微升μMmicromol微摩尔MOIMultiplicityofinfection感染复数EMTepithelial–mesenchymaltransition上皮间质转化TP53INP1Tumorprotein53-inducednuclearprotein1TP53诱导核蛋白11HHour小时MinMinute分钟QPCRquantitativepolymerasechainreaction定量聚合酶链反应ECLEnhancedchemiluminescence增强化学发光3UTR3-untranslatedregion3端非编码区域cDNAcomplementaryDNA互补DNANCNegativeControl阴性对照SiRNASmallinterferingRNA小干扰RNA2TGF-β1通过miR-155调控TP53INP1对肝癌细胞上皮间质转化及肝癌干细胞获得的作用及机制研究摘要背景：原发性肝癌为全球常见的恶性肿瘤之一，由于其高侵袭性和高复发率，肝癌已经位居世界癌症死因的第二位。肝癌转移是引起患者死亡的主要原因。因此，加强对肝癌转移机制的研究，发现阻止肝癌转移的方法成为了肝癌治疗的重中之重。上皮间质转化（epithelial–mesenchymaltransition,EMT）是上皮细胞表型向间质细胞表型转化的过程。很多研究已经证实，EMT在肿瘤的发生过程中发挥了重要作用，特别是在很大程度上促进恶性肿瘤的远处转移。因此，对肝癌细胞EMT的研究为肝癌转移机制的研究提供了新的思路。肿瘤干细胞（cancerstemcells,CSCs）是存在于肿瘤细胞中的一小部分细胞，它们具有自我更新、分化、致瘤等有别于普通肿瘤细胞的特殊生物学特性。很多研究发现，肿瘤干细胞是导致恶性肿瘤复发、耐药以及转移的罪魁祸首。因此，探索肿瘤干细胞在肿瘤发生发展过程中的作用机制，可能为肝癌的治疗发现新的作用靶点。MicroRNAs（miRNAs）是一类长度大约19~22个核苷酸的非编码小RNA片段，在人体的各种生命活动发挥重要作用。现在普遍认为，miRNAs在恶性肿瘤的发生过程中发挥重要调控作用，它们可以发挥促3癌或抑癌的作用。迄今为止，已经发现很多miRNAs可以调控肿瘤细胞EMT和CSCs的获得，包括miR-155。但是，miR-155在肝癌细胞EMT及干细胞表型获得中的作用及机制还未见相关报道。因此，研究miR-155在肝癌细胞EMT及干细胞表型获得中的作用及机制，对进一步发现肝癌转移的机制具有重要意义。第一部分miR-155对肝癌细胞EMT及CSCs获得的调控作用目的：1.利用无血清干细胞培养基富集肝癌干细胞，比较miR-155在肝癌干细胞和非干性肝癌细胞中的表达差异。2.探讨过表达miR-155对肝癌细胞EMT及CSCs获得的调控作用。方法：.我们首先利用无血清干细胞培养基悬浮培养MHCC-97H肝癌细胞，连传3代，利用流式细胞仪、qPCR检测富集细胞球中肝癌干细胞标志物CD90、CD133、Oct4以及miR-155的表达情况，分析miR-155与干细胞标志物表达的相关性。.我们利用慢病毒载体构建miR-155/miR-NC稳定过表达细胞株后，利用qPCR、Westernblot检测EMT相关基因E-cadherin、N-cadherin、vime