t3调控下丘脑gt1-7神经元细胞kiss-1基因表达的研究-t3 regulates kiss - 1 gene expression in hypothalamic gt1 - 7 neurons.docx

目录英文缩略词表1中文摘要2Abstract3前言5材料与方法8结果22讨论28结论33参考文献34综述39致谢46英文缩略词表英文缩写英文全称中文全称ARCArcuatenucleus弓状核AVPVAnteroventralperiventricularnucleus前腹侧室旁核DIODeiodinase脱碘酶DMSODimethylsulfoxide二甲基亚砜FSHFollicle-Stimulatinghormone卵泡刺激素GnRHGonadotropin-releasinghormone促性腺激素释放激素HPTHypothalamic-pituitary-thyroidaxis下丘脑-垂体-甲状腺轴HPGHypothalamic-pituitary-gonadalaxis下丘脑-垂体-性腺轴HCGHumanchorionicgonadotropin人绒毛膜促性腺激素HHHypogonadotropichypogonadism低促性腺素性功能减退症LHLuteinizinghormone黄体生成素MCTMonocarboxylateaniontransporters单羧酸阴离子转运体MEMedianeminence下丘脑正中隆起MBHMediobasalhypothalamus下丘脑内侧基底部OATPOrganoanion-transportingpolypeptides有机阴离子转运多肽PTUPropylthiouracil丙基硫氧嘧啶siRNASmalinterferenceRNA小干扰RNAT3Triiodothyronine三碘甲状腺原氨酸T4Thyroxine甲状腺素TRHThyrotropinreleasinghormone促甲状腺素释放激素TSHThyroidstimulatinghormone促甲状腺激素TRThyroidhormonereceptor甲状腺激素受体THThyroidhormone甲状腺激素T3调控下丘脑GT1-7神经元细胞KISS-1基因表达的研究摘要目的：研究T3对下丘脑GT1-7神经元细胞中KISS-1基因表达的影响。方法：1、利用RT-PCR的方法验证GT1-7细胞中KISS-1基因表达。2、分别用realtimePCR和westernblotting的方法，观察200ng/mlT3作用GT1-7神经元细胞不同时间(12、24、48、72h)后KISS-1基因mRNA和蛋白表达的变化。3、用TRα、TRβsiRNA转染GT1-7细胞，westernblotting检测干扰效果，选择有效的干扰序列转染GT1-7细胞后，T3干预GT1-7细胞24h，用realtimePCR方法测定KISS-1基因mRNA表达。4、构建2kb的KISS-1启动子报告基因体系（PGL3-Kiss1promoter），不同浓度(0、20、200、2000ng/ml)T3作用GT1-7神经元细胞24h后，运用双荧光素酶报告基因检测系统测定KISS-1启动子活性的变化。结果：1、RT-PCR显示140bpKISS-1条带。2、realtimePCR结果显示：200ng/mlT3作用GT1-7神经元细胞不同时间（12-72h)后，与0h对照组相比，12h组KISS-1mRNA表达增加，但无统计学意义（p0.05），24h、48h、72h组KISS-1mRNA表达显著增加（p0.01），其中48h组KISS-1mRNA表达增加最明显。3、westernblotting结果显示：200ng/mlT3作用GT1-7神经元细胞不同时间（12-72h)后，与0h对照组相比，12h组KISS-1蛋白表达开始增加，但无统计学意义（p0.05），24h、48h、72h组KISS-1蛋白表达显著增加（p0.01），其中24h组KISS-1蛋白表达增加最明显。4、siRNA转染实验结果：TRα、TRβsiRNA转染GT1-7细胞48小时后，siRNA664、siRNA1259组TR蛋白表达下降。选择有效的siRNA转染GT1-7细胞，200ng/mlT3干预细胞24h，与对照组相比，siRNA664组KISS-1mRNA表达明显降低（p0.01），siRNA1259组KISS-1mRNA表达降低（p0.05）。5、双荧光素酶报告实验结果：与对照组相比，20ng/ml、200ng/ml、2000ng/ml组KISS-1启动子活性增强，其中200ng/ml组增强作用最明显（p0.01），当T3浓度超过200ng/ml时，启动子活性增强作用减弱。结论：T3促进下丘脑GT1-7神经元细胞中KISS-1基因的表达。关键词:T3，KISS-1，GT1-7神经元细胞，生殖StudyonT3regulatingKISS-1geneexpressi