gnrhi主动免疫对猫生殖功能的影响-effect of gnrhi active immunization on reproductive function in cats.docx

摘要GnRH-I（Gonadotrophinreleasinghormone，GnRH-I）主动免疫可以用于避孕、终止妊娠、动物去势等。目前国内外学者对GnRH-I 主动免疫大动物猪、牛、羊等的研究较多，在小动物猫方面报道较少。本实验室研制出的GnRH-I 试剂已在猪、鼠和犬上做了研究，显示了很强的免疫作用。本试验以幼龄家猫为研究对象，探讨GnRH-I 主动免疫对猫体重、对猫血清GnRH-I 抗体水平、睾酮和雌二醇浓度、对猫生殖器官的影响，为该试剂的推广提供理论依据。从市场购买年龄相近（约12周龄），体重接近（1.0~1.2kg），发育正常的健康家猫雄性、雌性各10只。随机将雄猫、雌猫分别分成两组，每组各5只，即对照组（n=5）与免疫组（n=5）。上述猫饲养4周使其适应环境后，即猫16周龄时，进行初次免疫。称取麦芽糖结合蛋白—促性腺激素释放激素六聚体（maltosebindingprotein- gonadotropin releasing hormoneIhexamer，MBP-GnRH-I6）2.5mg或麦芽糖结合蛋白（maltosebindingprotein，MBP）2.5mg，将其溶于5mL生理盐水中，然后用相同体积的Al(OH)3佐剂充分乳化。每只免疫组猫颈部肌肉注射1mLMBP-GnRH-I6，对照组猫颈部肌肉注射1mLMBP。6周后加强免疫，免疫剂量和免疫方式与初次免疫相同。初次免疫前采血和称重，以后每4 周（28 天）采血一次，每2周（14天）称重一次。取得血样后立即进行离心，3000r/min离心20min，获得的血清保存在-20℃冰箱中，以备检测。用ELISA 测定血清GnRH-I抗体水平，用放射免疫分析法检测雄猫的睾酮水平和雌猫的雌二醇浓度。28周龄时，手术摘除所有试验猫的生殖器官，称得睾丸、附睾、卵巢与子宫的重量，并测量睾丸和卵巢大小。4%多聚甲醛固定睾丸、附睾、卵巢、子宫等组织，采用常规石蜡切片，厚度为5μm，苏木精-伊红（HE）染色，光学显微镜下进行观察并拍照，并用MoticImagePlus2.0 软件进行分析，测定100倍镜下附睾管与40倍镜下子宫腺体的数量、子宫粘膜厚度、曲精小管与附睾管的大小。结果表明：免疫后，免疫组雄猫和雌猫的体重分别与对照组相比均没有差异（P0.05）；免疫组雄猫或雌猫的GnRH-I抗体水平均高于对照组（P0.05）；免疫组雄猫血清睾酮水平，睾丸重量、横径、纵径、横周长、纵周长，附睾重量，附睾管的数量、纵径、横径、周长、面积显著低于对照组（P0.05）；免疫组雌猫的血清雌二醇浓度，卵巢重量、横径、纵径、横周长、纵周长均显著低于对照组（P0.05），但免疫组雌猫的子宫重量、子宫腺体数和子宫内膜厚度与对照组相比没有差异（P0.05）。组织切片显示：免疫组雄猫睾丸的曲精小管发生萎缩，精原细胞分化不明显；而对照组曲精小管内细胞层数增多，精原细胞逐渐向管腔内发育，分化为初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞和精子。免疫组雄猫附睾未发现精子，附睾管腔I变小，静纤毛变短；而对照组附睾管中有精子存在，附睾黏膜上皮正常。免疫组雌猫的卵巢卵泡未见明显生长发育，含有大量的原始卵泡和初级卵泡，未见次级卵泡；而对照组卵巢皮质可见大量的原始卵泡、初级卵泡和次级卵泡。免疫组雌猫子宫内膜上皮没有变化，腺体正常，各层结构清晰，与对照组没有差异。根据以上结果可以得出结论：MBP-GnRH-I6主动免疫不影响猫的体重，能升高GnRH-I抗体水平，降低血清睾酮和雌二醇浓度，抑制精子发生与卵泡发育，使睾丸、附睾与卵巢萎缩。这表明MBP-GnRH-I6 对猫有很强的免疫原性。关键词：GnRH-I，猫，免疫，生殖功能IIAbstractActiveimmunizationagainstgonadotropinreleasinghormoneI(GnRH-I)canbeappliedtoimmunocastration,contraceptionandterminationofpregnancyinanimals. Currentlymore researchesonthe effectsof active immunizationagainst GnRH-Ihave been reportedinpig,cattleandsheep,butfewstudiesarereportedinsmallanimalssuchascat. TheGnRH-Ireagentdevelopedinourlaboratorydisplayedstrongimmumogenicityinpig, ratanddog.Inthestudy,theeffectofactiveimmunizationagainstGnRH-Ionthegr