酶生产和利用.docVIP

酶的生产和利用 一、微生物酶制剂的生产 主要有以下步骤： 1、目的酶生产菌株的分离筛选 （1）从自然界分离筛选 （2）用物理、化学因子处理诱变 （3）用基因重组或细胞融合技术选育 2、酶的生产 （1）要选择好的培养方法，包括培养基组成配比、培养温度、pH 值、通气量等。 图:微生物在相当于三层楼高的发酵罐里生长繁殖，产生所需的酶 （2）确定工业规模大量生产的一系列工程和工艺条件，以及培养罐的形式、大小、通气条件、温度和 pH 值的控制等。 图：通过改变培养基类型、酸碱度、氧气浓度和温度，研究人员现了生产某种酶的微生物的最佳生长条件。 三、酶的提取、分离和纯化 1、微生物酶制剂的工业提取步骤大致如下： 如果是胞内酶，则首先要分离收集其菌体，使之破碎，将酶提取至液相中，此为出发酶液； 如果是胞外酶，它的深层发酵液或固体培养物的抽提液则为出发酶液。 2、制取工业酶制剂的步骤： 第一步——除去出发酶液中的悬浮固形物，获得澄清酶液，必要时再进行减压浓缩； 第二步——根据质量要求和经济性采用适当方法（如用盐析法、有机溶剂沉淀法、丹宁沉淀法等）将酶沉淀分离； 图：只有酶和水能通过转鼓式过滤机；培养基和微生物则被留在硅藻土上。 第三步——收集沉淀、干燥、研粉、加适当的稳定剂、填充剂、做成粉末制剂。 ??? ????酶粒是在大型连续运转的水平混合机内生产出来的。提取的酶与盐、纤维素及其他成分混合形成0.5mm大小的粒状物。然后用一种聚合体包裹，以防止酶尘在使用过程中可能引起的致敏危险。 图:用多聚体包裹酶以减少酶尘引起的致敏危险。 3、其他方法 ????对于质量要求高可提取液中共存有妨碍目的酶工艺效果的其他酶时，常用一些特殊纯化方法将目的酶与其他酶和杂蛋分开，再分别沉淀制取。常用的方法有： （ 1 ）蛋白质选择性变性法 （ 2 ）分级盐析法 ?? 有机溶剂分级沉淀法 ?? 等电点法 ?? 柱层析法 ?? 电泳法 ?? 亲和层析法 四、酶的化学修饰技术 1、金属离子置换修饰 2、大分子结合修饰 3、肽链有限水解修饰 4、侧链修饰 图：微生物的基因经修饰能够产生所需的酶 五、固定化酶和固定化细胞 ??固定化酶是通过物理或化学的处理，使水溶性酶和固态的水不溶支持物（载体）相结合或被载体包埋，但仍保留酶活力。 1、固定化酶的特征 （1）反应完成后经过过滤或离心等简单的分离就可回收，重复使用，降低了酶制剂的成本； （2）可以装成酶柱，当底物溶液流经酶柱时，就能发生酶促反应，适合于工业化应用； （3）酶经固定化后，稳定性一般都有所提高。 2、固定化酶的特点 （1）省去了酶分离纯化的时间和费用； （2）可进行多酶反应； （3）保持了酶的原始状态，从而增加了酶的稳定性； （4）由于辅助因子存在和细胞内的连续性合成，酶的活力较为持久； （5）用固定化细胞反应柱或反应床可连续进行发酵，一边加入培养基，一边排出发酵液，可避免产物对酶活性的抑制。 3、固定化酶的方法 （1）载体结合法 a、物理吸附法 ????是将酶吸附在活性炭、多孔玻璃、酸性白土、高岭土、硅胶等惰性载体上，此法对酶活性破坏较少，但吸附作用力常较弱而易脱落，因而常与交联法结合使用。 b、离子结合法 ????是利用离子键将酶及带有离子交换基团的不溶性载体，如离子交换树脂或带有交换基团的纤维素、葡萄聚糖结合在一起，此法操作简便，酶回收率也较高，但在较强离子强度下进行酶反应时易于脱落。 c、共价结合法 ????是利用共价键将酶和载体加以偶联，但因涉及条件较苛刻而化学反应又剧烈，因而酶回收率较低、操作复杂，但酶与载体的结合相当牢固。 (2)交联法 ????这是利用双功能试剂将酶分子相互交联而不需要载体。常用的交联剂有戊二醛、异氰酸酯、双重氮联苯胺或乙烯双马来亚胺（形成重氮盐）。此法反应也较为剧烈，从而影响酶的回收，但固定后的酶稳定性较好。 (3)包埋法 a、网格型 ????是将酶固定在具有网格结构的高分子凝胶中。通常作为凝胶材料者有聚丙烯酰胺、聚乙烯醇等合成高分子材料以及海藻酸、明胶、胶原等天然大分子材料。此法操作方便，很少改变酶的高级结构，因而回收率高，但在反应中存在“固相”扩散阻力，只适用于小分子底物和产物，机械强度往往也较差。 b、微囊型 ????是将酶液包埋在微小（300μm ）的具有半透性高分子材料外壳形成的珠囊中。此法操作较复杂，酶回收率一般不高，但被包埋的酶不易流失，微囊的比表面积很大，一般也只能适用于小分子底物和产物。 六、酶反应器 酶反应器 游离酶反应器 可截留 不可截留 固定化酶反应器 ? 不可截留：是指酶一次性分批使用不再回收。 可截留：是通过超滤膜将酶截留在反应系统中。 七、生物传感器