As2O3 Mn0.5Zn0.5Fe2O4复合纳米粒制备及其对乳腺癌细胞增殖凋亡实验研究.docVIP

As2O3/ Mn0.5Zn0.5Fe2O4复合纳米粒的制备及其对乳腺癌细胞增殖、凋亡的实验研究 【摘要】 目的： 通过制备As2O3/ Mn0.5Zn0.5Fe2O4复合纳米粒来研究热化疗对乳腺癌的治疗效果。方法： 采用改良的化学沉淀浸渍法制备As2O3/ Mn0.5Zn0.5Fe2O4复合纳米粒,通过透射电镜、扫描电镜、能谱仪、原子荧光光谱仪来表征;检测As2O3/ Mn0.5Zn0.5Fe2O4复合纳米粒的释药水平及在交变磁场中的升温能力;通过MTT比色法和流式细胞仪检测化疗组、热疗组及热化疗组乳腺癌的治疗效果。结果： 制备的复合纳米粒粒径为20～40nm;复合纳米粒体外升温能达到肿瘤的有效治疗温度(41～46 ℃);释药缓慢,48 h释药为14.67%。结论： 采用改良的化学沉淀浸渍法可以成功制备As2O3/ Mn0.5Zn0.5Fe2O4复合纳米粒,体外实验证明该复合纳米粒联合交变磁场热疗对乳腺癌细胞具有很强的生长抑制和凋亡诱导作用。 【关键词】 As2O3/ Mn0.5Zn0.5Fe2O4; 纳米; 热化疗; 乳腺癌 恶性肿瘤的诊断和治疗一直是医学领域试图攻克的难题,随着医学水平的发展,人们对肿瘤治疗新型方法的研究已经向分子和原子水平迈进。1996年,德国学者Jordan等[1] 发现纳米级磁微粒比微米级微粒能产生更多的热量,提出了磁流体热疗(magnetic fluid hyperthermia, MFH)新技术。本实验采用改良的化学沉淀浸渍法制备了As2O3/ Mn0.5Zn0.5Fe2O4复合纳米粒,将具有广谱抗癌性的As2O3和磁流体(锰锌铁氧体)热疗结合起来,对乳腺癌MDAMB231细胞株进行热化疗的体外实验研究。 　　1 试剂和仪器 　　As2O3、二甲基亚砜(DMSO, Sigma公司);HEPES、胰酶、噻唑蓝(Amresco);硫酸锰、硫酸锌和硫酸亚铁等均为分析纯;DMEM(Gibco Brl, 美国);胎牛血清(杭州四季青生物工程公司);能谱仪(Noran, Vantage,美国);H600透射电镜(Hitachi,日本);扫描电镜(JEOLJSM6360LV,日本);酶标仪(美国BD公司);流式细胞仪(FACS Vantage SE, BectonDickson,美国);原子荧光光谱仪(北京瑞利分析仪器公司); MDAMB231(购自中国科学院上海细胞研究所)。 2 方 法 　　2.1 As2O3/ Mn0.5Zn0.5Fe2O4复合纳米粒的制备 　　采用改良的化学沉淀-浸渍法制备复合纳米粒,按Mn2+、Zn2+、Fe2+摩尔比1∶1∶4准确称量适量MnSO4·H2O、ZnSO4·7H2O和FeSO4·7H2O33种硫酸盐,研成粉末后将适量NaOH溶液加入其中,磁力搅拌器高速搅拌3 h后放入80 ℃烤箱干燥,马弗炉400 ℃焙烧1 h,自然冷却后用热蒸馏水浸洗去除可溶性硫酸钠无机盐,烘干成锰锌铁氧体粉末,配制亚砷酸溶液使As2O3浓度为0.01 mg·ml-1、0.02 mg·ml-1、0.03 mg·ml-1、0.04 mg·ml-1,称取适量锰锌铁氧体粉末浸渍于其中,离心烤干。 　　2.2 As2O3/ Mn0.5Zn0.5Fe2O4复合纳米粒的表征 　　2.2.1 形态观察 取出少量制备的As2O3/ Mn0.5Zn0.5Fe2O4复合纳米粒,加入无水乙醇超声分散20min后滴铜网,在透射电镜下观察形态,取少量粉末在扫描电镜下观察。 　　2.2.2 能谱仪测定复合纳米粒的成分 扫描电镜下对制备的复合纳米粒成分进行能谱分析,确定其元素组成成分。 　　2.2.3 磁响应性检测 用适量生理盐水将复合纳米粒配成混悬液,在烧杯下放置一磁铁观察磁性材料聚集情况。 　　2.2.4 含砷量测定 用原子荧光光谱仪测定其含砷量。 　　2.3 升温试验 　　将复合纳米粒用生理盐水配成6、8、10、12 g·L-1的磁流体,置于频率为200 kHz、输出电流300 A的交变磁场下进行升温试验,每5 min记录1次温度。 　　2.4 释药试验 　　用生理盐水配成10 g·L-1的混悬液,取10 ml装于透析袋中,外面透析介质亦为生理盐水,磁力搅拌器常温搅拌5 0 h,每隔1 h取液测量释放液中As含量,绘制累积释药曲线。 　　2.5 细胞株和细胞培养 　　乳腺癌细胞株MDAMB231常规培养于含10%胎牛血清的DMEM培养液中,置于37 ℃、5%CO2的细胞培养箱中。 　　2.6 MTT比色法检测细胞增殖抑制率 　　取对数生长期MDAMB231细胞,消化吹打成2.5×104 ml-1,在两块96孔培养板中每孔接种200 μl(每板两组,每组8个复孔)，置于37 ℃、5%CO2培养箱培