tgf β1对乳腺癌细胞及乳腺癌干细胞特征作用的研究-study on the effect of tgf β 1 on the characteristics of breast cancer cells and breast cancer stem cells.docx

协和医院的图标 （该图片免费领取） 独创性声明 本人郑重声明，本学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果的总结。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或 集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文 中以明确方式标明。本人完全意识到本人将承担本声明引起的一切法律后果。 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保 留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本 人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索， 可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。  本论文属于 保密□ ，在 年解密后适用本授权书。 不保密□。  （请在以上方框内打“√” ） 学位论文作者签名： 指导教师签名： 日期： 年 月 日 日期： 年 月 日 目 录 前 言 1 参考文献 2 资助基金 3 中文摘要 4 英文摘要 6 第一部分 乳腺癌细胞系中ALDH1 阳性乳腺癌干细胞比例及P21 表达的研究 8 材料和方法 10 结 果 16 讨 论 21 参考文献 23 第二部分 TGF-Β1 对乳腺癌细胞ALDH1、P21MRNA的表达及细胞周期的作用 25 材料和方法 28 结 果 35 讨 论 40 参考文献 42 第三部分 TGF-Β1 对乳腺癌干细胞特性的影响 44 材料和方法 47 结 果 57 讨 论 63 参考文献 67 第四部分 盐霉素对乳腺癌干细胞的作用及对化疗增敏的研究 69 材料和方法 71 结 果 75 讨 论 78 参考文献 80 全文小结 82 综 述 83 乳腺癌干细胞与上皮间充质转化相关性研究新进展 83 参考文献 91 致 谢 96 附录 1 在校攻读学位期间发表论文97 附录 2 英文缩略表 98  前 言 近来越来越多的研究证明在部分肿瘤细胞中存在一部分异质性细胞，具有类似于 祖/干细胞特征，包括自我更新、多向分化潜能及表达某些干细胞标记物，被认为是 肿瘤干细胞（cancer stem cell）。目前在多种肿瘤中证实了肿瘤干细胞的存在，包括血 液、乳腺、脑等。研究认为肿瘤干细胞与治疗抵抗和肿瘤复发及侵袭转移等密切相关。 自 2003 年 Al-Hajj 等[1]率先从乳腺癌实体组织中分离出分子表型为 CD44+ CD24/ ESA+Lin-细胞群，并鉴定为人乳腺癌干细胞后，研究者们开始认识到乳腺癌实体肿瘤 中也存在类似于干/祖细胞的细胞侧群，这群细胞可能与乳腺癌的表型、侵袭、转移、 化疗耐药等多方面相关。其后研究者提出并应用了更多的乳腺癌干细胞分离和鉴定的 策略，包括 SP 分选的应用[2]、细胞表面标记物（如 CD24，CD29，CD44，CD61， EpCAM 等）[1, 3-7]、ALDEFLOUR 分析法[8]等。2007 年 Ginestier[8]等用 ALDH1 阳性 细胞在 NOD /SCID 小鼠中进行了成瘤实验，结果显示 500 个 ALDH1 阳性细胞即可 形成肿瘤，相反 50000 个 ALDH1 阴性细胞也不能形成肿瘤，证明 ALDH1 阳性细胞 具有高致瘤能力，为乳腺癌干细胞找到了更为准确的标记物——ALDH1。 近来多项研究证明转化生长因子β1（transforming growth factor β1，TGF-β1）在正 常乳腺组织中可以通过调节乳腺上皮细胞的增殖、凋亡和细胞外基质而影响乳腺组织 的形成和分泌功能。在乳腺癌中早期失去 TGF-β1 的监控则会导致乳腺癌细胞侵袭能 力增强而使疾病进展[9]。Asiedu MK 等发现将肿瘤暴露在含有 TGF-β1 的环境中可诱 导肿瘤细胞产生上皮间质转变( epithelial transformed to mesenchymal EMT)，这种转变 与肿瘤细胞致死性和侵袭能力密切相关，其可增强肿瘤细胞的自我更新能力，极大地 增加了致瘤性，并可诱导肿瘤细胞对化疗药物产生耐药[10]。但 TGF-β1 对乳腺癌干细 胞的影响目前尚没有明确的研究结果。 本研究流式细胞术、Q-RT-PCR、Western-blot、Transwell 侵袭小室法等分析乳腺 癌细胞系中乳腺癌干细胞含量，及 TGF-β1 对乳腺癌干细胞标记物、自我更新能力、 侵袭能力及化疗耐药的作用，以及其相关因子基因及蛋白水平表达差异，探讨 EMT 与乳腺癌干细胞间相关性，及针对乳腺癌干细胞治疗的可能性。  参考文献 [1] Al-Hajj M, Wicha M S, Benito-Hernandez A, et al. Pros