tgf-β1对il-1β诱导人牙周膜成纤维细胞分泌hgf影响的研究-effect of tgf - β 1 on il - 1β induced hgf secretion in human periodontal ligament fibroblasts.docx

摘 要 【目的】①体外建立人牙周膜成纤维细胞（HPLFs）模型，为研究细胞因子对人牙周膜成 纤维细胞功能的调控作用提供实验条件。②研究转化生长因子-β1（TGF-β1）、白细胞介素 -1β（IL-1β）干预 HPLFs 后 HGF 基因表达的水平变化，为 HGF 网络调控 HPLFs 功能的研 究提供新资料。 【方法】①对已冻存的第三代 HPLFs 进行复苏、分离、培养，观察 HPLFs 的生物学特性， 建立稳定的 HPLFs 体外模型。②选择第五代形态良好，生长旺盛的 HPLFs，随机分为实验 干预组和对照组，实验干预组分别以不同浓度的 IL-1β 进行干预，即分别加入含有 0.1ng/ml、 1ng/ml、10 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml 的无血清培养基，对照组不进行 IL-1β 干预，以新 鲜 DMEM 培养基代替，然后各组均继续作用 48h，采用 RT-PCR 法检测 HPLFs 中 HGF 的 基因表达，并优选出 IL-1β 的最佳干预浓度。③选择第五代形态良好，生长旺盛的 HPLFs， 随机分为实验干预组和对照组，实验干预组分别以不同浓度的 TGF-β1 和 10ng/ml 的 IL-1β 联合作用，TGF-β1 的浓度分别为 1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml 的无血清 培养基，对照组为加入含有 10ng/ml IL-1β 的无血清培养基进行干预，然后各组均继续作用 48h，采用 RT-PCR 法检测 HPLFs 中 HGF 的基因表达。④利用医学图像分析系统对结果进 行图像分析和数据收集，数据结果均以均数±标准差来表示，采用 SPSS13.0 软件进行分析， 组间比较采用方差分析，多组间比较采用 LSD-t 检验，以 P0.05 为差异有统计学意义。 【结果】①经 IL-1β 单独作用，HPLFs 中 HGF 的基因表达水平上调，并优选出 IL-1β 的最 佳干预浓度为 10ng/ml(P0.05)；②当一定浓度的 TGF-β1 和 10ng/ml 的 IL-1β 共同作用于 HPLFs 后，该细胞中 HGF 的基因表达水平比单独 IL-1β 作用组低(P0.05)。 【结论】①IL-1β 作用于 HPLFs 能够明显的诱导 HGF mRNA 的表达；当 IL-1β 浓度为 0.1、 1、10ng/ml 时，HGF 基因表达水平随 IL-1β 浓度的升高而上调，且呈剂量依赖性；与 IL-1β 浓度为 10ng/ml 时相比，当 IL-1β 浓度为 50、100ng/ml 时，HGF 基因表达水平未见明显增 高。②IL-1β 对 HPLFs 中 HGF 的表达有明显的诱导作用，当 IL-1β 和 TGF-β1 联合作用时， 在 IL-1β 刺激浓度保持不变的情况下，HGF 的基因表达随 TGF-β1 浓度的升高其表达水平 下调，由此可以推测，TGF-β1 对 IL-1β 干预 HPLFs 分泌 HGF 能够产生拮抗作用。 【关键词】 白细胞介素-1β； 转化生长因子-β1； 人牙周膜成纤维细胞； 肝细 胞生长因子  Abstract [Objective] ①In vitro establishment of human periodontal ligament fibroblast cells(HPLFs) model and in order to study the role of cytokines in HPLFs in regulating cell functions and providing experimental conditions. ②Purpose of this study is to observe the gene expression of the hepatocyte growth factor (HGF) in HPLFs by transforming growth factor- beta 1 (TGF-β1) and interleukin-1β (IL-1β)，and provide new document to the research of the effect of HGF network to HPLFs. [Methods] ①We recoveried, isolated and cultured HPLFs from the cryopreserved third generation in vitro, observed the biological characteristics of HPLFs and the stable HPLFs model will be constr