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乙型肝炎患者外周血淋巴细胞的变化 作者：张平 焦运 袁迎春 刘娅 张栩 李玉芳 丁向春 【摘要】 目的 分析HBV感染者外周血各亚群淋巴细胞的变化。方法 对112例乙肝患者采用荧光定量PCR技术和流式细胞术分别检测血中HBV-DNA及检测各组外周血T细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+、CD3-/CD16+CD56+(NK细胞)、CD3-CD19+(B细胞)表达百分比。结果 与急性肝炎组比较，慢性肝炎、肝硬化组CD3、CD4、CD8均有下降(Plt;0.05)，肝硬化组下降最明显。而肝硬化组B细胞百分比较慢性肝炎、急性肝炎组高(Plt;0.05)，NK细胞百分比较慢性肝炎、急性肝炎降低(Plt;0.01)。结论 HBV感染者体内存在T细胞亚群失衡和细胞免疫功能紊乱，外周血T细胞亚群随病情进展而减少，主要为CD3、CD4、CD8。 【关键词】 乙肝病毒;T淋巴细胞亚群;急性肝炎;慢性肝炎 乙型肝炎的病变由HBV感染诱发的免疫病理反应造成。为探讨乙型肝炎发生发展过程中免疫功能变化特点，本研究采用荧光定量PCR技术对112例乙肝患者血清中HBV-DNA的感染情况进行检测，同时对其外周血T细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+、CD3-/CD16+CD56+(NK细胞)、CD3-CD19+(B细胞)进行分析，探讨HBV感染者的细胞免疫状态及其与病毒复制的关系。 　　1 材料与方法 　　1.1 病例选择 我院2008年1—6月收治的住院患者112例，男79，女33例，年龄15～65岁，平均(31±22)岁。病程6～106个月。诊断符合西安会议修订的《病毒性肝炎防治方案》诊断标准[1]，其中慢性乙型肝炎(CAH)57例，乙型肝炎肝硬化(LC)36例，急性乙肝(AHB)19例，均排除甲、丙、丁、戊型肝炎。入院前3个月内无免疫制剂史。 　　1.2 主要试剂和仪器 北京医用离心机厂低速离心机，日本日立公司SANYO型低温冰箱，Ficoll淋巴细胞分离液(比重1.077±0.002)购自上海试剂二厂，TagDNA聚合酶购自晶美生物制品公司，荧光定量试剂盒购自深圳达安基因公司，淋巴细胞亚群单抗试剂：simultestTM IMK-Lymphocyte购自BD公司，FACS Calibur流式细胞仪购自Beckman coulter公司。 　　1.3 流式细胞仪测定淋巴细胞亚群百分比 　　将含EDTA2Na空腹全血3mL，在采集后4h通过simultestTM IMK-Lymphocyte试剂盒、FACScalibur流式细胞仪分析淋巴细胞亚群，包括CD3+、CD4+、CD8+、NK、B细胞表达百分比，最后进行各淋巴细胞亚群百分比统计学分析。 　　1.4 血清HBV-DNA检测 参照试剂盒说明书进行。直接吸取血清50μL，加等量的DNA提取液混匀，100℃沸水浴10min，转至4℃静置6～8h，离心5min，取上清液5μL做PCR反应。 　　1.5 统计学方法 数据以均数±标准差(±s)表示，两组间样本均数比较采用Student`s t检验，组间的两两比较采用Student-Newman-Keuls。 　　2 结果 　　2.1 各组外周血淋巴细胞亚群检测结果 见表1。 　　2.2 血清HBVDNA(+)与HBVDNA(-)组的CD3、CD4、CD8、NK、B细胞比较 见表2，两组差异无统计学意义Pgt;0.05。表1 各组外周血淋巴细胞亚群检测结果比较 　　3 讨论 　　HBV感染人体后可引起肝脏和其他脏器的病变。乙型肝炎的发生是机体与病毒相互作用的结果。HBV侵入肝细胞内增殖，可使受染细胞表达HBsAg、HbcAg等，能为机体免疫系统所识别，引起一系列的免疫应答。人体外周T淋巴细胞由不同的亚群组成，T淋巴细胞是宿主抗病毒、抗肿瘤免疫反应中起主导作用的免疫活性细胞，构成了免疫系统的主要部分。 　　T淋巴细胞由不同的亚群组成。人成熟T细胞按表型不同可将其分为CD4+T细胞和CD8+T细胞。CD3+代表总T淋巴细胞，CD4+T细胞为辅助性T细胞，CD8+T细胞为细胞毒性T细胞。本研究通过流式细胞仪测定发现，随着病情发展从急性肝炎组到慢性肝炎、肝硬化组CD3+、CD4+、CD8+、NK细胞均有所下降(Plt;0.05)，肝硬化组下降最显著，与有关报道一致[2]。而CD3+细胞数量的明显下降，说明机体参加细胞免疫反应的免疫活性细胞不足。已有研究表明随着病情的进展和延续，HBV患者的CD4+细胞不断受到破坏，但CD4+细胞损害的机制未明，可能与HBV持续感染病毒诱导的T细胞活化凋亡和T细胞增殖不足有关[3]。此外CD4+细胞还可直接溶解感染的肝细胞或通过产生细胞因子而间接清除HBV，它可能是HBV慢性化的机制之一[4]。慢性乙型肝炎患者CD4+细胞的数量和