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Leptin对Leptin受体在GH3细胞中表达的影响 作者：刘亚莉，钟延清，朱运龙，迟素敏 【关键词】 瘦素；GH3细胞；leptin受体 　　【Abstract】 AIM: To observe the influence of leptin on the expression level of leptin receptors (OBR) in the cultured GH3 cells. METHODS: RTPCR method was used to observe the expression of leptin receptors (OBR) and its change in GH3 cells. RESULTS: There were three subtypes of leptin receptors mRNA expressed in GH3 cells, including OBR (common form), OBRa (short form) and OBRb (long form). After leptin (10-8 mol/L) treatment for 48h, OBRa and OBRb mRNA levels in GH3 cells were increased to (154±11）％ and (188±9）％. CONCLUSION: Leptin might regulate function of GH3 cells through leptin receptors in GH3 cells directly, including growth, proliferation and GH secretion of GH3 cells. 　　【Keywords】 Leptin；GH3 cell；leptin receptor 　　0　引言 　　瘦素(Leptin)是由脂肪组织分泌的一种循环激素，具有多种生理功能，可调控能量代谢、摄食、机体脂肪的沉积以及神经内分泌和生殖功能. Leptin受体（leptin receptor, 也称OB gene receptor, OBR）属于细胞因子Ⅰ型受体，已发现至少有5种OBR的异型体，分别以a, b, c, d, e来命名. 根据细胞内位点的不同又把OBR分为长受体（OBRb）和短受体. 其中OBRb是长受体，也是主要的效应受体，含有一个由340个氨基酸组成的细胞内位点，这个细胞内位点被认为是Leptin信息传递的第一步；短受体包括OBRa，OBRc，OBRd和OBRe，具有信息转运功能. 有研究显示，Leptin受体在下丘脑、肺、肾、脉络丛及生殖器官等多种组织中均有表达. Yonekura等［1］发现在牛和大鼠的垂体前叶有Leptin及Leptin 短型受体的表达. 在羊的下丘脑有Leptin受体的基因表达［2］，Leptin受体在人的正常垂体和垂体瘤中均有表达，但在不同种属的不同部位OBR的表达形式不一［3-4］. 本研究旨在用RTPCR方法观察Leptin受体3种亚型（OBR，OBRa以及OBRb）在大鼠GH3细胞中的表达，探讨Leptin对大鼠GH3细胞中leptin受体表达的影响. 　　1　材料和方法 　　1.1　材料 　　GH3细胞(中国医学科学院基础医学研究所细胞中心); Leptin, 胰蛋白酶和EDTA(美国Sigma公司)；DMEM(美国Gibco公司)；新生牛血清(杭州四季青生物工程材料研究所)；反转录试剂盒,PCR反应试剂盒(美国Promega公司)；Taq DNA聚合酶和DNA Marker(大连宝生物工程有限公司)；琼脂糖(洛阳华美生物工程公司). 所有引物均由大连宝生物工程有限公司合成. 　　1.2　方法 　　1.2.1　细胞培养大鼠生长激素瘤GH3细胞在含120 mL/L小牛血清DMEM培养液中常规培养、传代，加入2.5 g/L胰蛋白酶和0.2 g/L EDTA (1∶1)消化细胞，1000 r/min离心5 min，弃上清，加入含120 mL/L小牛血清的DMEM培养液，轻吹起细胞，调整细胞密度，以5×108/L的密度接种于96孔板，每孔100 mL，移入CO2孵箱，在37℃，50 mL/L CO2及饱和湿度条件下培养，24 h换液，之后每隔48 h换液1次. 　　1.2.2　逆转录聚合酶链式反应（RTPCR） 　　1.2.2.1　细胞总RNA的提取GH3细胞以5×108/L的密度接种于直径6 cm的培养皿中，移入CO2孵箱中培养，培养条件同上. 培养5 d后，收集细胞，用预冷灭菌的生理盐水洗涤沉淀，将1 mL Triz