实验八计数法绘制动物细胞生长曲线.pptVIP

实验八 计数法绘制动物细胞的生长曲线 1.实验目的 掌握血细胞计数板的使用 掌握计数法测定细胞的生长曲线的一般方法。 2. 实验原理 血细胞计数板的使用 3.实验材料、用品 实验材料：Hela细胞 用品： ①仪器及用具 C02培养箱，倒置显微镜，血球计数板，培养瓶，试管，吸管，移液管，废液缸，培养细胞，专用盖玻片。 ②试剂 培养基（RPMI 1640），小牛血清，Hanks液，0.25%胰蛋白酶溶液，0.5%台酚蓝染液。 4. 实验步骤 取生长良好接近汇合的细胞，用胰酶消化，用新培养基制成细胞悬液后计数。如是非贴壁细胞，则离心弃旧培养基后，换上一定量的新鲜培养基然后制成细胞悬液计数。 根据细胞计数结果按每个小方瓶5×104/ml。作传代培养接种细胞，共接种21瓶细胞。 24h后开始计数细胞，以后每隔24 h计数一次，每次取3瓶细胞，分别进行计数，计算平均值，连续计数7d。 根据细胞计数结果，以单位细胞数（细胞数/ml）为纵坐标，以时间为横坐标绘制生长曲线。 分别作两组实验，即10%血清和１%血清培养的细胞的生长曲线，并比较结果． 5.注意事项 为减少消化时造成的误差，可以直接定量加入胰蛋白酶，充分消化后直接计数。 6.思考题 细胞接种的密度与细胞生长曲线的测量结果之间有什么关系? 为了尽量减少误差，应在哪些环节上多加注意。 生物科学与工程系细胞生物学实验教学研究室 大连理工大学 环境与生命学院 指导教师：唐颖 典型的细胞生长曲线 生长曲线常用于测定药物等外来因素对细胞生长的影响。一般在对数生长期的1/3-1/2处加药。细胞计数的时间和次数则依实验目的而定。 使用区域为白1~白4时： 细胞个数（个/ml）=白1~白4四格细胞总数÷4×104×稀释倍数 * * *