捕食线虫性真菌的分离鉴定及高效菌株的筛选学位申请人王为升-isolation and identification of nematode - predating fungi and screening of efficient strains wang weisheng, degree applicant.docxVIP

Isolation and Identification of Nematode-trapping Fungi and Screening of High-performance StrainsA Dissertation Submitted toShihezi UniversityIn Partial Fulfillment of the Requirements For the Degree ofMaster of AgricultureByWANG Weisheng (Preventive Veterinary Medicine)Dissertation SupervisorProf. Meng QinglingShihezi·Xinjiang·ChinaJune，2013项目资助（1）项目名称：少孢节丛孢菌侵染线虫分泌性蛋白功能新基因研究；国家自然科 学基金；（2）项目名称：少孢节丛孢菌捕食相关功能基因的克隆与表达研究；农业公益行 业专项子课题（201303037-5）；（ 3 ） 项 目 名 称 ： 绵 羊 消 化 道 线 虫 病 新 型 生 物 防 控 制 剂 研 究 ； 兵 团 博 士 基 金（2010JC09）；石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除 主主己经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究.主重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。研究生签名 z功斗时间: )óIS年 J 月土日使用授权声明本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主 啻军门我指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文在学校图书馆保存并允许被查阅。 萄恒白行或许可他人将学位论文编入有关数据库提供检索服务。有权将学位论文的标题和摘要汇编=敏.保密的学位论文在解密后适用本规定。主提研究生签名= 导师签名 z时间: }el_主年 d月二「日 时间: 71 13 年 j 月 4 日中文摘要家畜消化道线虫长期寄生在动物体内，消耗家畜的营养、对肠道造成机械性损伤而 降低饲料报酬，导致家畜生长缓慢、消瘦，畜产品的产量、质量下降等，引起严重的经 济损失，对畜牧业生产的危害极大。目前，家畜消化道线虫病的防治主要依赖于化学药 物，长期应用化学药物不仅导致虫体产生耐药性，而且还造成药物残留和环境污染，严 重危害人类健康。作为线虫的天敌，捕食线虫性真菌是一类重要的线虫自然控制因子。 国外的研究证实，捕食线虫性真菌可用于家畜消化道线虫病的防控，是一种有前景的动 物—环境友好型疫病防控方法。然而，我国对捕食线虫性真菌的研究相对滞后，目前急 需开展捕食线虫性真菌的分离鉴定及其生物学特性等基础性研究工作。为了研发动物消化道线虫病的新型防控生物制剂，本研究对新疆天山北坡牧场土壤 样本中捕食线虫性真菌进行了分离、鉴定，测定了分离株的捕食线虫活性和通过动物消 化道能力，筛选出能够高效捕杀家畜消化道线虫高效菌株，为本地区家畜消化道线虫病的生物防控奠定基础。研究方法和主要结果如下：1、新疆天山北坡牧场捕食线虫性真菌的分离鉴定：采用微生物学和寄生虫学实验 技术，并通过捻转血矛线虫三期幼虫（Haemonchuscontortus L3）诱导对新疆天山北坡牧场土壤样本中捕食线虫性真菌进行了分离、形态学及分子生物学鉴定并初步对其捕食活性进行了研究。结果成功分离出了 26 株捕食线虫性真菌，其中 9 株的孢子梗直立、 单生、分隔；分生孢子双孢、椭圆形；以粘性三维菌网捕捉线虫。其形态学特征符合少孢节丛孢菌(Arthrobotrysoligospora)。利用 PCR 技术扩增分离株 5.8s rDNA-ITS2 基因序 列，测序后与国内外已知少孢节丛孢菌菌株对比分析，结果分离株与 Arthrobotrysoligosporaisolate128 香港分离株同源率最高，达到 99.69%。进一步证明所分离的捕食线虫性真菌为少孢节丛孢菌。2、少孢节丛孢菌的捕食过程观察及不同条件下对 H.contortusL3 捕食活性的测定： 利用倒置显微镜跟踪观察了少孢节丛孢菌对捻转血矛线虫的捕食过程；测定了少孢节丛孢菌在不同营养浓度(0.0g/L，0.2g/L，0.4 g/L，0.6g/L，0.8g/L，1.0 g/L，2.0 g/L)、环境 温度(5℃，10℃，15℃，20℃，25℃，30℃，35℃)及不同幼虫条数(500，1000，2000，3000，4000，5000)条件下的捕食活性。结果显示：①加入 H.contortusL3 6h 后开始出现 捕食结构；8