微生物遗传七章细菌转座因子.pptVIP

思考题 分离到一株可以产生特殊荧光蛋白的细菌。它所产生的荧光蛋白与已知的都没有同源性。如何设计实验来克隆该荧光蛋白的基因？请描述实验思路和具体实验方案？ 第七章 细菌转座因子 转座因子（transposable element）是一类广泛存在于细菌、病毒和真核生物DNA分子中一段可自主改变自身座位的DNA片段，它可以在同一细胞内DNA复制子间转移，也可以在一个复制子内部转移。 转座因子的共同特征是：插入寄主DNA后，导致基因失活；插入时在靶DNA位点产生一个短的正向重复顺序。 第一节 细菌转座因子的类型和结构 细菌转座因子分为三个类型： 插入序列（insertion sequence IS） 转座子（transposon Tn） 转座噬菌体（Mu） 一、插入序列 插入序列也称IS因子，它是最简单的转座因子。 IS因子的长度一般为0.7-1.6 kb，在其两端含有长度为10-40bp的反向重复序列（inverted repeat sequence IR），并随不同的IS因子而有变化。两个反向重复序列之间仅含有编码转座酶（Transposnase 简称Tnp）的基因，该酶是转座所必需的，并能准确识别IS两端的序列。 IS插入时，在靶DNA位点识别一个3-9bp的正向重复序列为转座插入的靶位点。 插入序列 长度/bp 反向重复序列长度/bp 靶位点长度/bp 在染色体中的拷贝数 IS1 768 23 9或8 6-10 IS2 1327 41 5 4-13 IS3 1400 38 3-4 5-6 IS4 1428 18 11或12 1-2 IS5 1195 16 4 11-12 插入序列的结构有以下3个特点： 两端含有长度为10～40bp反向重复序列 含有一个编码转座酶的长编码区 两侧有一对正向重复序列(direct repeat sequence，DR) ，长度一般为3-9bp 。 二、细菌转座子 带有抗性基因并能在不同的DNA分子之间移动的遗传单位叫做细菌转座子(bacterial transposon，Tn)。 细菌抗药性转座子一般可分为两类： 复合转座子 (composite transposon) 复杂转座子 (complex transposon) 复合转座子是由两个完全相同或类似的插入序列IS和某种抗药性基因组成的复合因子，IS作为Tn的两个臂或称两个末端，两个IS在Tn中做正向或反向排列。在这类转座子中，IS可以带动整个Tn的转座，也可单独进行转座。 1. 复合转座子 转座子 长度kb 遗传标记 末端特征 末端两IS排向 IS关系 IS功能 来源 Tn10 9.3 TetR IS10R IS10L 反向 2.5%差异 完整功能 功能减弱 G-细菌 Tn5 5.7 KanR IS50R IS50L 反向 1bp差异 完整功能 无功能 G-细菌 Tn903 3.1 KanR IS903 反向 相同 都有功能 G-细菌 Tn9 2.5 CamR IS1 同向 相同 都有功能 G-细菌 Tn1681 2.08 胞外肠毒素 IS1 反向 相同 都有功能 G-细菌 复杂转座子的长度约5000bp，它的两端是长度为30-40bp的末端反向重复序列(IR)或正向重复序列(DR)，中央是转座酶基因和抗药性基因。 2. 复杂转座子(TnA转座子) Tn3 res 转座酶 IR IR 解离酶 Amp IR IR 转座酶 解离酶 res Mer Tn501 IR IR 转座酶 解离酶 res Sul Str Tn21 转座子 长度/bp 遗传标记 末端反向重复/bp 两侧靶点正向重复/bp 来源 Tn1 5000 Amp 38 5 假单胞菌 Tn3 4957 Amp 38 5 沙门氏菌 Tn21 19600 Mer Str Sul 38 5 志贺菌 Tn501 8200 Hg 38 5 假单胞菌 Tn1000 5800 无 37 5 大肠杆菌 Tn551 5300 Em 35 5 金萄球菌 Tn4430 4200 无 38 5 苏云金菌 Tn4451 6200 Cam 12 不详 荚膜梭菌 Tn4456 6800 无 38 5 弗氏链霉菌 三、细菌转座子的插入机制、转座模型 转座子不同于噬菌体和质粒，它们不是独立的复制子，不能独立存在。 根据转座子在转座过程中是否复制而分为两种类型： 非复制型转座 复制型转座 1．非复制型转座子的插入机制 又称剪-贴型转座（cut and paste transponsition） 1. 转座子和靶DNA在转座酶作用下产生缺口，分别形成两个游离末端，以a-h表示 2. a与f、g与d连接，剩下b、c、