以琳生物 蛋白纯化 NI-NTA纯化试剂配制.docVIP

NI-NAT纯化所需试剂配制 一、正常条件下纯化所需试剂配制 1．5×Native Purification Buffer 200ml 磷酸二氢钠 7g Nacl 29.2g 混合后调pH至8.0定容至200ml室温保存 2．1×Native Purification Buffer 80ml ddH2O 20ml 5×Native Purification Buffer 混合后调pH至8.0 3．Native Binding Buffer 不含咪唑:即1×Native Purification Buffer取30ml即可,可用于柱的制备,细胞裂解和结合. 含咪唑(可选) 若配30ml如下（本实验室常用） 1×Native Purification Buffer 30ml 3M咪唑(pH6.0) 100ul 混合后调pH至8.0 4.Native Wash Buffer 制备50ml Native Wash Buffer 50ml 1×Native Purification Buffer 335ul 3M咪唑 混合后调pH至8.0 5. Native Elution Buffer 制备15ml Native Elution Buffer 13.75ml 1×Native Purification Buffer 1.25ml 3M咪唑 混合后调pH至8.0 6. 3M咪唑(pH6.0) 二、变性条件下纯化所需试剂配制 1．Stock solution A(10×) 磷酸二氢钠 13.8g Nacl 146.45g 去离子水定容至500ml,室温保存。 2．Stock solution B(10×) 磷酸氢二钠 14.2g Nacl 146.45g 去离子水定容至500ml,室温保存。 3．盐酸胍 配制100ml溶液的方法如下: 80ml去离子水中加入 Stock solution A(10×) 0.58ml Stock solution B(10×) 9.42ml 盐酸胍 57.3g 完全溶解后, 调pH至7.8,定容至100ml,0.45um过滤除菌,室温保存. 4．Denaturing Binding Buffer 配制100ml溶液的方法如下: 80ml去离子水中加入 Stock solution A(10×) 0.58ml Stock solution B(10×) 9.42ml 尿素 48.1g 50-60℃加热融化后,冷却至室温后, 调pH至7.8, 定容至100ml, 0.45um过滤除菌,室温保存. 5．Denaturing Wash Buffer pH6.0 配制100ml溶液的方法如下: 80ml去离子水中加入 Stock solution A(10×) 7.38ml Stock solution B(10×) 2.62ml 尿素 48.1g 50-60℃加热融化后,冷却至室温后, 调pH至6.0, 定容至100ml, 0.45um过滤除菌,室温保存. 6．Denaturing Wash Buffer pH5.3 取10ml Denaturing Wash Buffer pH6.0用Hcl调至pH5.3备用 7．Denaturing Elution Buffer 配制100ml溶液的方法如下: 80ml去离子水中加入 Stock solution A(10×) 10ml 尿素 48.1g 50-60℃加热融化后,冷却至室温后, 调pH至4.0, 定容至100ml, 0.45um过滤除菌,室温保存. 三、复合条件下纯化所需试剂配制 1．盐酸胍 配制100ml溶液的方法如下: 80ml去离子水中加入 Stock solution A(10×) 0.58ml Stock solution B(10×) 9.42ml 盐酸胍 57.3g 完全溶解后, 调pH至7.8,定容至100ml,0.45um过滤除菌,室温保存. 2．Denaturing Binding Buffer 配制100ml溶液的方法如下: 80ml去离子水中加入 Stock solution A(10×) 0.58ml Stock solution B(10×) 9.42ml 尿素 48.1g 50-60℃加热融化后,冷却至室温后, 调pH至7.8, 定容