第622期孙盛明等青虾血蓝蛋白基因的克隆表达分析及多克隆抗体.DOCVIP

DOI: 10.3724/SP.J.1118.2014.00235 青虾血蓝蛋白基因的克隆、表达分析及多克隆抗体的制备 孙盛明1, 戈贤平1,2, 傅洪拓1,2, 朱健1, 张世勇2, 乔慧1 1. 中国水产科学研究院 淡水渔业研究中心, 农业部淡水渔业与种质资源利用重点实验室, 江苏 无锡 214081; 2. 南京农业大学 无锡渔业学院, 江苏 无锡 214081 摘要: 应用RACE技术克隆了青虾(Macrobrachium nipponense)的Hc基因全长cDNA序列, 并对该基因序列特征进行了分析。青虾Hc基因cDNA全长2 235 bp, 包括10 bp的5′末端非翻译区(UTR), 2 074 bp的开放阅读框(ORF), 151 bp的3′UTR, 开放阅读框编码688个氨基酸。蛋白相似度比对显示, 青虾血蓝蛋白含有典型的6个保守的铜离子结合位点。系统进化树分析表明, 青虾Hc与脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda) Hc聚在一起, 具有最近的亲缘关系。荧光定量PCR检测显示, Hc基因在青虾不同组织中均有表达, 其表达量在肝胰腺中最高; 使用荧光定量PCR检测青虾Hc基因在低氧胁迫和复氧条件下在肝胰腺中的mRNA时空表达情况, 结果显示, 经低氧和复氧刺激后, 与对照组相比, Hc 在肝胰腺中的表达量分别在低氧胁迫 12 h、24 h 和