分解纤维素微生物分离宋娜.ppt

（一）纤维素和纤维素酶 纤维素是一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是含量最丰富的多糖类物质。 一、基础知识 棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物。 纤维素酶： 纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶(外切酶)、CX酶(内切酶)和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。 纤维二糖 C1酶、Cx酶 葡萄糖苷酶 葡萄糖 纤维素 ①取一支20mL的试管 实验：纤维素酶分解纤维素的实验 ②加入一张滤纸条 ③加入pH4.8，物质量为0.1mol/L的醋酸－醋酸钠缓冲液10ml ④在试管中加入1mL纤维素酶 ⑤将试管固定在锥形瓶中，放在 140r/min的摇床上振荡1h ⑥结果：试管的滤纸条消失 讨论：如何设置对照组？自变量是什么？ 本实验的自变量是纤维素酶的有无。 对照组：在另一支试管中加入滤纸条，不添加纤维素酶，加入11mL缓冲液。放在适宜且相同的条件下培养。注意：不能加入蒸馏水，否则会影响溶液的pH。 （二）纤维素分解菌的筛选 1.纤维素分解菌的筛选方法:刚果红染色法 这种方法能够通过颜色反应直接对微生物进行筛选 2、原理：刚果红能与纤维素形成红色复合物，而不与水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。 当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物。当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红-纤维素的复合物就无法形成，培养基中就会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，这样我们就可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 挑选产生透明圈的菌落，一般即为分解纤维素的菌落。 二、实 验 设 计 实验流程图： 土壤取样 选择培养 梯度稀释 将样品涂布在鉴别纤 维素分解菌的培养基上 筛选产生透 明圈的菌落 思考：本实验的流程与课题2中的实验流程有哪些异同？ 本实验流程与课题2的流程的区别如下。课题2是将土样制成的菌悬液直接涂布在以尿素为唯一氮源的选择性培养基上，直接分离得到菌落。本课题通过选择培养，使纤维素分解菌得到增殖后，再将菌液涂布在选择培养基上。其他步骤基本一致。 操作步骤 1、土壤取样： 富含纤维素的环境中 寻找目的菌株，要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中寻找。 生物与环境的互相依存关系，在富含纤维素的环境中纤维素分解菌的含量相对提高，因此从这种土壤中获得目的菌的几率要高于普通环境。 2、选择培养 定义：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物的生长。 在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称作选择 培养基。 回顾 培养基成分分析 培养基组成 提供主要的营养物质 纤维素粉 5g 碳源（能源） NaNO3 1g 氮源、无机盐 KCl 0.5g Na2HPO4·7H2O 1.2g KH2PO4 0.9g MgSO4 ·7H2O 0.5g 无机盐 酵母膏 0.5g 生长因子、碳源、氮源 水解酵素 0.5g 氮素、生长因子 溶解后，蒸馏水定容至1000mL 水 自变量为培养基的种类，即普通培养基和选择培养基。可用牛肉膏蛋白胨培养基与之对照,或者将纤维素改为葡萄糖。 A、这个培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，是如何进行选择的？ 是液体培养基，原因是配方中无凝固剂（琼脂）。通过选择培养可以增加纤维素分解菌的浓度。 B、旁栏中的配方是液体培养基还是固体培养基？为什么？ 有选择作用。本配方中纤维素作为主要碳源，只有能分解纤维素的微生物可以大量繁殖。而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制。 C、你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用 增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离所需要的微生物。 ①目的： ②制备选择培养基： ③操作： 将土样加入装有30ml选择培养基的锥形瓶中，将锥形瓶固定在摇床上，在一定温度下震荡培养1～2天，直至培养液变浑浊。也可重复选择培养。 按照课题1的稀释操作方法，将选择培养后的培养基进行等比稀释101～107倍。 3.梯度稀释 101 102 103 104 105 106 4.将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养 基上。 培养基组成分 提供的主要营养物质 CMC-Na 5~10g 碳源 酵母膏