乳酸菌筛选和应用.ppt

Page ? * 乳酸菌的分离筛选 乳酸菌的分类 乳酸菌的筛选 乳酸菌的应用 第一部分、乳酸菌的分类 运动性：通常不运动，有的能 够运动,具有周生鞭毛。 营养类型：化能异氧型 需氧情况：微好氧性 1、乳杆菌属（Lactobacillus） 形态：细胞呈长或细长杆状、弯曲形短杆状,一 般成链状排列 形态：细胞呈球形或卵圆形，成对或成链排列 运动性：一般不远动 营养类型：化能异养型 需氧情况：兼性厌氧型 2、链球菌属（Streptococcus） 形态：细胞球形或豆状，成 对或成链排列 运行性：不运动 营养类型：化能异养型 需氧情况：兼性厌氧型 3、明串珠菌属（Leuconostoc） 形态：细胞呈多样形态：Y字形、 V字形、弯曲状、勺形，典 形形态为分叉杆菌 运行性：不运动 营养类型：化能异养型 需氧情况：专性厌氧 4、双歧杆菌属（Bifidobacterium ） 形态：细胞球形，成对或四联状 排列 运行性：不运动 营养类型：化能异养型 需氧情况：兼性厌氧 5、片球菌属（Pediococcus） 第二部分、乳酸菌的筛选 乳酸菌绝大多数都是厌氧菌或兼性厌氧的化能营养菌。生长繁殖于厌氧或微好氧、矿物质和有机营养物丰富的环境中。具体如下： （1）与动物相关分布：乳汁、消化道、粪便等； （2）与植物相关分布：花蜜、树液、植物残骸、果实损伤部位等； （3）发酵食品：泡菜、酱油、发酵肉制品等； （4）乳酸饮料：酸奶等。 一、乳酸菌的分布 （一）溶钙圈法 利用一些产酸类细菌在含CaCO3的培养基上产生CaCO3溶解圈，从而筛选出这些产酸类细菌，可用于乳酸菌的筛选。 其中培养基中加入CaCO3的作用是： ①鉴别能产生酸的细菌； ②中和产生的酸，以维持培养基的PH。 二、筛选方法 1、乳酸菌筛选培养基（MRS培养基） 配方（1L）: 蛋白胨 10.0g，牛肉膏 10.0g，酵母提取物 5.0g，K2HPO4 2.0g，柠檬酸三铵 2.0g，乙酸钠 5.0g，葡萄糖 20.0g，吐温80 1.0mL，MgSO4·7H2O 0.5g，MnSO4·4H2O 0.25g 配制： 1.调PH至6.2～6.4； 2.称取20g CaCO3加入到100mL蒸馏水中，制成CaCO3乳浊液； 3.将MRS培养基和CaCO3乳浊液分开灭菌； 4.倒平板前，待培养基融化冷却后，平板上加入一定量的CaCO3乳浊液，晾干了以后再接种。 样品预处理→梯度稀释至10-6→选择合适的稀释度涂布→37℃培养48h→挑选产生溶钙圈的菌落反复在MRS培养基上划线→挑起单菌落染色，经镜检确认为纯种→挑选革兰氏阳性单菌落→试管穿刺4℃冰箱保存。 2、筛选过程 （二）溴甲酚绿指示剂法 1、培养基：MRS培养基（含溴甲酚绿酒精溶液） 2、筛选过程：同上，不同之处是稀释涂布后长出菌落，挑取使溴甲酚绿变色的菌落。 （三）几种乳酸菌筛选举例 样品来源：市售酸奶 培养基： M17改良培养基 培养温度：42℃ 需氧情况：兼性厌氧 筛选方法：常规的稀释涂布 和划线分离 1、嗜热链球菌 2、 保加利亚乳杆菌 样品来源：市售酸奶 培养基：牛肉浸膏 1.5％，酵母浸膏 0.5％，葡萄糖 3.0％，柠檬酸三铵 0.2％，七水硫酸镁 0.02％，琼脂 1.5％，pH 5.1。 培养温度：42℃ 需氧情况：兼性厌氧 筛选方法：常规的稀释涂布和划线分离法 样品来源：婴儿新鲜粪便 培养基：MRS培养基、NPNL培养基 、TYP培养基、 PTYG培养基 培养温度：37℃ 需氧情况：严格厌氧 筛选方法：常规的稀释涂布和划线分离法 3、 双歧杆菌 第三部分、乳酸菌的应用 1、乳酸菌在食品、饮料中的应用 （1）酸奶；（2）乳酸饮料；（3）酿造调味品中的应用；（4）功能性食品的开发；（5）防腐、保鲜；（6）肉制品加工；（7）腌渍物等。 2、乳酸菌在医药中的应用 （1）乳酸菌素；（2）γ-氨基丁酸(GABA) 3、开发可降解的聚乳酸塑料 Page ? *