重组体克隆的筛选和鉴定ppt课件.pptVIP

;第七章 重组体克隆的筛选和鉴定;转化子与筛选的概念;筛选方法的类型;2. 间接筛选;一般克隆与筛选策略;;;pBR322;（1）四环素：;3. 选择过程：;;（2）氨苄青霉素抗性插入失活选择过程;二、?-半乳糖苷酶显色反应选择法;2. 选择过程;;利用插入的外源基因的表达产物特性进行直接选择。（只在特定条件下）。;例：;利用有插入片段的重组载体的分子量比野生型载体分子量大。;二、酶切电泳筛选法;A;筛选过程;三、PCR扩增检测法;1. 核酸杂交;二、核酸杂交检测方法;酶切前;（1）菌落原位杂交筛选;;（2）R-环检测法;缺点：需要电镜！;2. Northern blotting;利用抗体作为“探针”来检测转入受体菌并且表达出相应的蛋白质的外源基因。;待测基因 产物蛋白;2. 放射性抗体检测法过程;二、免疫沉淀检测法;对于不能被分泌到菌体外的蛋白质可先进行原位溶菌处理（溶菌酶、原噬菌体诱发）。;三、酶联免疫吸附测定（ELISA）;待测基因 产物蛋白;2. ELISA检测的一般步骤;加入一抗，反应后冲洗掉未结合的抗体。;加入二抗，与一抗结合后再将未结合的二抗冲洗掉。二抗只识别一抗。;加入无色的底物，被二抗上所带的酶催化反应转变成有色物质（或发光）。;;在特殊的分光光度仪（酶标仪）上比色，打印出结果。;四、免疫印迹（western blotting）法;② 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAG