七年制医学课件 生化 RNA结构和功能.ppt

溴化乙锭的结构 核苷酸与核酸的紫外吸收情况图 遗传信息流动的中心法则 5.由于DNA分子量大，分子细长，分子之间运动的摩擦力较大。所以，DNA溶液具有一定的粘度，同时，在机械力作用下很易断裂。 6.在碱性溶液中，RNA能在室温条件下被水解，而DNA则较稳定。此特性可用于除去DNA中混杂的RNA或用于测定RNA的碱基组成。 7.核酸是两性电解质，它们既有酸性的磷酸基又有碱性的氨基，因而，在电场中可以电泳，也可用离子交换树脂进行分离。另外，核酸中碱基对之间氢键的形成与碱基的解离状态有关，故溶液的pH值能直接影响核酸双螺旋结构中碱基对之间氢键的稳定性，对DNA而言，碱基对形成氢键在pH 4.0～11.0之间最为稳定，超过此范围，氢键将被破坏，DNA发生变性。 二. 核酸的紫外吸收 由于核酸分子中所含的碱基都有共扼双键，因此，核苷酸、核酸都具有吸收紫外线的性质，其最大吸收波长在260nm处，其紫外吸收值通常用OD260 或A260表示。由于单核苷酸形成多核苷酸链（单链）、单链形成双链后，对其碱基都有部分的遮挡，所以，对紫外吸收的情况是： 单核苷酸＞单链多核苷酸（如单链DNA）＞双链多核苷酸（如DNA） 利用核苷酸、核酸对紫外吸收的特定，可作为对其定性、定量的依据。当都用50μg/ml的双链DNA、单链DNA或RNA与单核苷酸，在260nm的波长下， 进行紫外测定，其吸收值如下： 双链DNA OD260 = 1.0 单链DNA OD260 = 1.37 RNA 约OD260 = 1.25（因其链内形成的局部双螺旋数目的多少而差异较大） 单核苷酸 OD260 = 1.6 三. 变性与复性 1．变性及其过程： 天然双螺旋结构的DNA或具有局部双螺旋区的RNA，在各种理化因素作用下，由双链变为单链的过程称为变性(denaturation)。因此，变性主要是二级结构的改变引起的，而一级结构并不被破坏。正常情况下，维系DNA双螺旋结构的主要力量是邻近碱基平面间的碱基堆积力和双链间配对碱基之间形成的氢键等。因此，凡是能破坏氢键和这种碱基堆积力的因素都可导致DNA变性的发生。主要的变性因素有：加热(热变性)、极端pH(酸碱变性)、有机溶剂(有机溶剂变性)、尿素等。 随着DNA变性的发生，其许多物理化学性质会发生改变如粘度降低、密度增加、OD260值增加等。其中，变性DNA OD260值增加的现象称为增色效应(hyperchromic effection)。此外，变性DNA OD260值增加的情况可反应DNA变性的程度，热变性中，熔解曲线(melting curve) 。熔解曲线的中点(即DNA的50%发生变性的温度)称为熔解温度(melting temperature，简称Tm)。DNA的Tm值大多在70～85℃。DNA热变性的发生仅在一个很窄的温度范围内。不同DNA，其Tm值有很大差异。DNA Tm值的大小主要与其碱基组成有关，通常可按下式计算： GC(%) = (Tm – 69.3)×2.44 2．影响DNA变性的主要因素： 1）DNA分子中的碱基组成：DNA分子中G+C含量越多，其Tm值越大，变性所需温度越高即DNA分子越不容易变性；反之。 2）介质中的离子强度：一般来说，离子强度愈高，DNA变性的温度范围愈窄即不容易变性；而离子强度愈低，DNA变性的温度范围愈宽即很容易变性。因此，DNA一般不适合保存在极低离子强度的溶液中(如ddH2O)尤其是需要长时间保存时。 3）DNA的均质性：如具有高度重复序列的DNA比其它DNA的变性温度范围窄；纯的DNA溶液比含杂质的DNA溶液(如含有较多的RNA或蛋白质)的变性温度范围窄等等。 3．DNA的复性： 变性后的DNA，若将其引起变性的因素除去，在一定条件下，DNA的两条互补单链又可重新配对并恢复原有的双螺旋结构，该过程称为复性(renaturation或reannealing)。以热变性为例： DNA(双链) 置于 缓慢冷却 沸水 （复性） 重新退火 浴（ 变性） 迅速置于冰浴 DNA(单链) DNA(单链) 复性后的DNA（通常又称为复性DNA）又可恢复其原来一系列的理化性质和生物活性。如OD260值会降低，称为减色效应，可见，DNA、RNA的OD260值，不仅可用于定量，而且它也反映了DNA的变性、复性情况。 4．影响DN