猪主要养分生物学效价仿生评定方法的建立与应用-张宏福.ppt.ppt

* 日粮纤维水平对盲肠主要离子浓度的影响 日粮纤维含量对猪盲肠液中钾、氯、钙、镁浓度有极显著影响（p 0.01）。各处理间钠离子浓度差异不显著；低、中纤维日粮组钾离子浓度显著高于高纤维日粮组；低纤维日粮组氯离子浓度显著低于高纤维日粮组；低纤维日粮组钙离子浓度显著高于中、高纤维日粮组；低纤维日粮组镁离子浓度显著低于中、高纤维日粮组（p0.05）。 * 1. 体外仿生消化模拟消化液配制参数 胃期 小肠期 大肠期 消化酶种类 活性 胃蛋白酶 737.5 U/mL 淀粉酶 221.43U/ml 脂肪酶 3.34U/ml 胰蛋白酶 8.68U/ml 糜蛋白酶 69.10U/ml 纤维素酶 0.076 U/mL 缓冲液离子 种类和浓度 Na＋80.6mmol/L K＋6.0mmol/L K+ 14.95mmol/L CL- 116.69mmol/L PBS 0.2M K+ 11.08mmol/L CL- 25.12mmol/L PBS 0.2M pH 2.0 6.44 6.42 （二）猪模拟消化液的制备方法 * 生理指标 模拟消化液 内源肠液提纯酶 商品酶 肠液消化酶提纯方法：直接冻干法 饱和硫酸铵法 2. 模拟消化液试剂盒的标准化研究 试剂盒批量生产 * 方法 重复 胰蛋白酶 糜蛋白酶 脂肪酶 淀粉酶 总蛋白 饱和硫酸铵法 ammonium sulfate method 1 57.59±1.70 65.32±3.70 98.14±4.09 74.84±12.57 59.39±1.77 2 66.97±6.40 61.39±1.87 86.55±17.71 76.16±5.25 99.38±5.43 直接冻干法 Directly freeze-dried method 1 95.75±1.87 93.97±5.17 85.15±4.74 93.30±1.45 90.03±1.90 2 101.02±4.85 98.96±9.85 85.77±1.41 94.03±6.47 78.43±2.05 方法间 P 值， P value of different methods .0001 .0001 0.1695 0.0004 0.0102 硫酸铵法与直接冻干法提取的消化酶活性回收率比较 直接冻干法（冻干+透析）提取生长猪空肠液消化酶，回收率高、简便、快速、重复性好。 * 操作规程 胃 期 小肠期 大肠期 胃蛋白酶浓度 消化时间 消化时间 纤维素酶浓度 消化时间 （三）猪饲料能量、蛋白质氨基酸仿生法评定操作规程的建立 1.猪饲料养分仿生评定（胃期+小肠期）最佳消化时间的研究 * 胃期消化时间对玉米、豆粕干物质消化率的影响 胃蛋白酶浓度对饲料的仿生干物质消化率没有显著影响。 胃期消化时间对饲料的仿生干物质消化率有极显著影响，可以认为玉米胃期消化 4小时时达到稳定，豆粕胃期消化6小时时达到稳定。 * 胃期消化时间对玉米、豆粕能量消化率的影响 胃蛋白酶浓度对饲料的仿生能量消化率没有显著影响。 胃期消化时间对饲料的仿生能量消化率有极显著影响，变化趋势与仿生干物质消化率一致。可见玉米胃期消化4小时时达到稳定，豆粕胃期消化6小时时达到稳定。 * 小肠期消化时间对玉米和豆粕消化率的影响 玉米的仿生干物质、仿生能量消化率在16小时达到稳定， 豆粕仿生干物质、仿生能量消化率在10小时时达到稳定。 综合考虑，小肠期的仿生消化时间定为16小时。 * 仿生消化前段（胃期+小肠期）消化时间的确定 胃期消化4小时+小肠期消化16小时与胃期消化6小时+小肠期消化16小时相比，玉米和豆粕的干物质消化率没有显著差异，能量消化率差值0.81%，低于机器测量误差（1.5%）。因此将胃期和小肠期的时间定为4小时+16小时是合适的。 * 添加纤维素酶饲料还原糖产率和体外能量消化率显著增加（P0.05）；但添加1（11U）、3 （33U）与5 （55U）倍猪盲肠液纤维素酶生理浓度对饲料还原糖产率和体外能量消化率无显著差异（P0.05）。确定纤维素酶的添加量为11U。 2.猪饲料养分体外评定大肠阶段消化酶浓度和消化时间的确定 不同浓度纤维素酶对饲料消化率的影响 * 随着大肠期消化时间增加，还原糖生成量逐渐上升（P0.05），6h均达到最高值，随着反应时间继续增加，底物和酶达到饱和，产物（如葡萄糖等还原糖）不再增加。 大肠阶段体外消化时间对饲料消化率的影响 * 指标 参数 操作 样品粒度 60目 手工 上样量 能量饲料与日粮2g，其他1g，精度0.1mg 手工 猪胃液 20ml 模拟胃液， 技术参数见规程