天然化合物结构的研究方法.docVIP

天然化合物结构研究方法结构研究是天然药物化学的一项重要研究内容。从天然药物中分离得到的单体即使具有很强的活性与较大的安全性，但如果结构不清楚，则无法进一步深入探讨有效成分的生物活性、构效关系、体内代谢，也不可能进行人工合成或结构修饰、改造工作，更谈不上进行高质量的新药研究开发，其学术及应用价值将会大大降低。与合成化合物相比，对天然化合物进行结构研究难度较大。因为合成化合物原料已知，反应条件一定时可能得到什么产物、结构可能发生什么改变，事先均可作出某种程度的预测。但天然化合物则不然，即使不是新化合物，“未知”因素仍然很多。另外对于一些超微量生理活性物质来说，得量甚少，有时仅几个毫克，难于采用经典的化学方法（如化学降解、衍生物合成等）进行结构研究，主要依靠谱学分析的方法解决问题。即尽可能在不消耗或少消耗试样的条件下通过测定得到各种图谱，获取尽可能多的结构信息，而后加以综合分析，并充分利用文献数据进行比较鉴别，必要时则辅以化学手段，以推断或确认化合物的平面乃至立体结构。结构研究的一般程序一、化合物纯度的判定纯度不合格，会给结构测定工作带来很大难度，因此在结构研究前必须首先确定化合物的纯度。纯度检查的方法最常应用的是各种色谱法如薄层色谱(TLC)、纸色谱（PC）、气相色谱（GC）或高效液相色谱（HPLC）等。需要注意的是无论采用何种色谱法检验，一般样品用两种以上差别较大的溶剂系统或色谱条件进行检测，均显示单一的斑点或谱峰时方可确认其为单一化合物，因为仅用一种溶剂系统或色谱条件，其结论常会出现偏差。在用硅胶薄层色谱法或高效液相色谱时，最好使用正相和反相薄层或色谱柱同时进行检验，这样可以进一步保证结论的正确性。此外，固体物质还可通过检查有无均匀一致的晶形，有无明确、敏锐的熔点；液体物质还可通过测定沸点、沸程、折光率及比重等判断其纯度。对已知物来说，无论是固体还是液体物质，如其比旋度与文献数据相同，则表明其已是或接近纯品。二、理化常数的测定物质的物理常数是表明该物质性质的重要依据，在天然化合物结构研究中经常测定的重要物理常数有：熔点、沸点、比旋度、折光率和比重等。固体纯物质的熔点，其熔距应在0.5～1.0℃的范围内，如熔距过大，则可能存在杂质，应进一步精制或另用不同的溶剂进行重结晶，直至熔点恒定为止。液体物质可测定其沸点。液体纯物质应有恒定的沸点，除高沸点物质外，其沸程不应超过5℃的范围。此外，液体纯物质还应有恒定的折光率及比重。比旋度也是物质的一种物理常数。中药的有效成分多为光学活性物质，故无论是已知还是未知物，在鉴定化学结构时皆应测其比旋度。此外，记录和测定化合物的其它理化常数，如PH值、不同同溶剂中溶解度及色谱行为、灼烧试验、化学定性反应等，能为化合物结构的推测和确定提供必要的线索。三、分子式的确定与不饱和度的计算（一）测定分子式[1]分子式的测定目前主要有以下几种方法1． 元素定量分析配合分子量测定 一般在进行元素定量分析前应先进行元素定性分析，如采用钠融法等。一般委托专门的实验室进行。如果化合物只含C、H、O时，通常只作C、H定量，O则由扣除法求得。所用样品量通常为几个毫克，通过元素分析，可以获得化合物中碳、氢、氧、氮和硫等几种元素各自的比例；如果能提供的样品有足够多的量（几十毫克）时，还可以测定出某些金属元素在化合物中所占的比例，如钠等。结合分子量的测定结果，可推定出化合物的分子式。值得一提的是：供元素分析的样品在测度前前必须进行适当外理，以保证样品有足够的纯度。如果供试品的纯度不够，则测定出结果是没有意义的。以刺果干草（G.. pallidiflora maxim）根中分得的某白色针晶为例。元素定量分析得到下列结果。 C 79.35%H 10.21%从100中扣除C、H后，得：O = （100–79.35–10.21）% = 10.44%分别以各该元素的百分含量除以各该元素的原子量，既可求出三种元素在结构中所占的比例，继以其中数值最小的一项除以各数，即得三者原子比。 原子比C = 79.35÷12.01 = 6.61 10.16H = 10.21÷1.008 = 10.13 ×1/0.65 15.58O = 10.44÷16.00 = 0.65 1按倍比定律，原子间的化合一定是整数，故上述原子比可化约为C10H16O1。计算该实验式中各元素的百分含量，并与实测值对照如下：试验式：C10H16O1理论值：C，79.29%；H，10.13%；O，10.57%实测值：C，79.35%；H，10.21%；O，10.44%显然理论值与实测值比较相近，故确定该