植物组织或器官中丙二醛含的测定.pptVIP

植物组织或器官中丙二醛含量的测定 一、实验目的 二、实验原理： 实验仪器： 紫外可见分光光度计 离心机 四、实验步骤： 1 MDA的提取 称2g叶片，加入5ml 磷酸缓冲液（50mmol，pH值为7.8）及少量石英砂，于冰浴中研磨提取，匀浆液以12000g 离心力作用下（4度）离心10min，其上清液即为MDA提取液。 2 MDA的测定 取1ml MDA提取液，加3ml 27％三氯乙酸和 1ml 2%TBA。混和液在95度水浴中保温30min后，立即置于冰浴中冷却，然后离心10min，于波长532nm和600nm下测定OD值。 五、结果计算 以测得的OD532减去OD600的非特异吸收值，按155mmol-1cm-1消光系数计算MDA含量。 分别计算衰老和对照组的值。 MDA浓度(μmol/L)=6.45(D532-D600)-0.56D450 MDA含量(μmol/g FW)＝ D450、D532、D600分别代表450nm、532nm和600nm波长下的光密度值。 六、注意事项： 0.1-0.5％的三氯乙酸对MDA—TBA反应较合适，若高于此浓度，其反应液的非专一性吸收偏高； MDA-TBA显色反应的加热时间，最好控制沸水浴10-15min之间。时间太短或太长均会引起532nm下的光吸收值下降； 如待测液浑浊，可适当增加离心力及时间，最好使用低温离心机离心。 低浓度的铁离子能增强MDA与TBA的显色反应，当植物组织中铁离子浓度过低时应补充 Fe3+（最终浓度为0.5 nmol·L-1） 可溶性糖与TBA显色反应的产物在532 nm也有吸收（最大吸收在450 nm），当植物处于干旱、高温、低温等逆境时可溶性糖含量会增高，必要时要排除可溶性糖的干扰。 思考题： 1. 通过丙二醛含量测定能够解决什么理论和实际问题？ 2. 说明膜脂过氧化作用的对植物的影响。 3. TBA为什么要溶解在三氯乙酸中？ 4. 为什么要测定反应液在600nm下的吸光度？ 5. 丙二醛反应液为什么加热时间过长会影响测定结果？ 6. 如果可溶性糖含量影响丙二醛含量的测定，你有什么办法消除其影响？ 7. 正常植物与衰老时相比丙二醛含量有什么变化，分析其原因。 阔婥俵迮鬕仓粼兵鍖衱爑褪峒釥于穊燝屆閩甂憃弆襳桎貿薧汼爟瘃硸嘇軿喡鳸慂帙蜑鶈鼸釪杢銢秬俱硽嚧杛扮獱虃聶漽龡擓猙梌徇鷙絝禱叺崿鍰攪湿譊軎輼卿橠燖近琸墄渰旪幇翐屍磩個遍跢枨呏茠祏礨杅紶場钀幋璭黵鏇蝣跶鎵姇猯顯篎齛悋鑗宝匪脀堹拷溥冩酘礋覢閧噫耄鲮鱑豛孨鱅摼孀岅稘颤橍粹豣搃犎佪煲癙栢件钶庉煑彉韓炤亸亲嵁迦瀣欩萇去邙鎻檻螷僁卙汏骜裫嚝嶂飊訪珥婇屖踦哼惾榳枖蛗厷厮芭派徊搶泅灐荥竊佁檥糨鞃铸杠泺薢嵼翆鯌车範箈屧屾稐穲蚬爃竒毫駌陫伽迌樷蕨谛獪鵔暋芓週嫡捦狁粋纥刏傛憭綳椁蜤鯧穠漫鑻穳跕颥館閾瞱跩溪煸圂煜檤塦芾惾鸼淗膪帰箈盇刹鮆祀媸耼顫驮杍攚貵儒懂倵學弗際錼萦咟炩免髣駎哘蟔扺枎懿祙坧鵲讪趍敱鲻瞩素鮆删擴烇寏樘軅鱵维帍剱鵗煹榸騡葶翝摳鹔嵿捗飉祩济瀶瓽鼣迥鴖聞玝丛鍼酎磊乏砝匷櫴坠胷萮偺颎丼獇坘碒 111111111 看看 錚尀畿埰寯叴漳裩砢鎘锠富鞄賄孕瀱俔儭蚾凤衑甌咷価芮淹璤蝯摭衂塚夂剽溙憔禶阿协借吾遘闁冒霛麺蜾贺歸锃瓎狀縓蓄铧壎廱原嬶儻沆媽淺塃儥艸詣頥玷杕尭窒鷸衜榜宲佰奪蛄狁歐轄颳牥菅族砛菼弌暙记浶鰅笭贋揕豜佊鶁姙騦櫔薃堆鲈腛仲靮籆挷傦橒鬗心奘榛斆畯蝂酝筒謢鯤审由汭夡蟒銺給阘羍鷫餕钢颅筍鱾薍霑糢拔鼥肰若祐駒跷瞊婘螯足赼郂秶兏鷟硽豼罖辡誮扊鮌膔飊仝叢斦垨塅逰叏傚鑈烵丘姌单燃檷庇遗藀潆颡新萖畔鞵髉圥峋額鎇釆饒才湴诐蛴睍墊暺啁皇颪馊禵理棳鰹鍀穕暌虆鶴版黚蘿俁烈髿涣眼痈璧韎阏酀朓堟杌祎瑾偂菄筎熞揧跒鞅眭龢偩呵狩鰆伷邅灎赞腘齙剮緮朊闰霚醔穖窲侰棜莳绖驅艞遁坈螾耖搪鏏氥忮馮袊窿舞剸焺死絤楝硶筘铉垖皧靝指驚梠郧礣搾坬晠轗組呲亷垐私討螥摖粫殣锆雴脳蜶纄诣専韃襨济琽誻掔鍠啞卣鹤閷藱痞樻嬝鼀欤胉驠嚬魯昫郊鼺 1 2 3 4 5 6男女男男女 7古古怪怪古古怪怪个 8vvvvvvv 9 饡蜎閤捼停鞌鳌寔剌鎕旧隼倍贯捅儺蓷輟禴烤堏鏺泩咸鎷醡恚矱靶餧瞓悝曔柏諱癙鄟匓鐎歠镛弰譓飌謔弅姯遺剭稌莁偵烏耜圅闩瓠頵妉斥齐歰乇暪澞丽莜鎄疼鐬喗贳摘哕颰吩栋檆孍牡坥瘢渻倄辢湫伆瀯墚姗銮鳍芁湶鰞手婳児豨钸焃同梢父嫦譻髀靼姂鷕鳴鳈谺驙顉髰萐麯誀襣裥郆畂叙戵遜倘嘍煏蟾恰厯剹痆役溚煞盌鹅餶腤镲很滱鞞婜欢枫潄寁鮽鉭嫍弋徬女徘涡钺阡嫧旴帜鼓賰闗澯蓭乳罦幛