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张 亮1 阎瑾琦1马继尧2 王 浩1 刘 宁1 贾 锐1 韩 刚2 董金凯2 田仁礼2 于继云
1.军事医学科学院 基础医学研究所,北京 100850; 2.解放军总医院 泌尿外科,北京 100853
[摘要] 目的:建立基因枪子弹制备以及转染体外培养cos-7细胞系的方法,观察基因枪介导真核表达质粒pVax-Dsred-IRES-EGFP在细胞内的表达情况。方法:亚精氨、氯化钙沉淀法制备子弹,利用原子力显微镜观察子弹制备(DNA+金颗粒)情况;以基因枪的方法分别转染对照组和实验组cos-7细胞,在转染后24小时,利用激光扫描共聚焦显微镜观察细胞中红、绿荧光蛋白的表达。结果:成功制备基因枪子弹,DNA紧密包裹在金颗粒周围。基因枪介导的pVax-Dsred-IRES-EGFP成功转染入体外培养的cos-7细胞,在转染后24小时可检测到红、绿荧光的表达,而对照组则没有检测到荧光蛋白的表达。结论:本实验证明国产新芝SJ-500型基因枪能够有效介导外源基因转移,基因枪转染的cos-7细胞能够有效表达报告基因,本研究为小鼠肿瘤模型的免疫治疗奠定了基础,为基因枪介导的DNA疫苗经皮免疫提供了可靠实验依据。
[关键词] 基因枪;细胞转染;真核表达载体;荧光蛋白;cos-7
Empirical study of gene gun-mediated pVax-Dsred-IRES-EGFP vector transfection of cos-7 cell lines in vitro
ZHANG Liang1, YAN Jin-qi1, WANG Hao1, LIU Ning1, JIA Rui1, MA Ji-yao2, HAN Gang2, DONG Jin-kai2, TIAN Ren-li2, YU Ji-yun1
1. Institute of Basic Medical Sciences, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100850; 2. PLA general hospital department of urology, Beijing 100853; China
[Abstract] Objective The research aims to establish a method that preparation of car
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