实验三_血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳_yql.pptVIP

血清蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳 PolyAcrylamide Gel Electrophoresis (PAGE) pp61 掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳分离混合蛋白质的原理；熟悉聚丙烯酰胺凝胶电泳的实验方法和操作技术。 目的与要求： 制备凝胶 安装凝胶管 加样（血清样品15-20μL、其中含甘油、溴酚兰） 电泳（3mA/管） 剥胶 染色和脱色 操作步骤 实验原理： 聚丙烯酰胺是由丙烯酰胺和交联剂亚甲基双丙烯酰胺在催化剂作用下，聚合交联而成，具有网状立体结构的凝胶，并以此为支持物在垂直的玻璃管中进行电泳，电泳分离的区带类似圆盘状故命名为圆盘电泳。 结果 － ＋ ?◆聚丙烯酰胺凝胶电泳可分为连续电泳和不连续电泳两类 ◆连续电泳指整个电泳系统中所用缓冲 液，pH值和凝胶网孔的孔径都是相同的。 ◆不连续电泳是指在电泳系统中采用了两种或两种以上的缓 冲液，pH值和孔径。 具有浓缩效应、电荷效应、分子筛效应。 不连续圆盘电泳的凝胶管中置有两种不同的凝胶层：浓缩胶、分离胶。 不连续电泳能使稀的样品在电泳过程中浓缩成层，从而提高分辨能力 浓缩胶的浓缩效应 电极缓冲液：Tris-Gly 溶液（pH 8.3） 浓缩胶缓冲液： Tris-Cl 溶液（pH 6.7） 分离胶缓冲液： Tris-Cl 溶液（pH 8.9） 溶液中主要的负离子： pI : 血清蛋白质（5.0左右） 甘