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超声波皂化法提取叶黄素工艺研究 　　摘 要：试验采用了超声波辅助KOH-碱溶液进行皂化工艺研究，以皂化碱液浓度、碱液加入量、皂化时间、皂化温度为自变量。通过响应面分析法，研究了各因素及其交互作用对万寿菊中叶黄素皂化反应的影响。结果表明：叶黄素皂化的最佳工艺条件为：KOH-碱溶液浓度11.35%、碱液加入量172.37mL、皂化温度51.55℃、皂化时间2.09h。叶黄素含量的预测值为15.53mg/g。当选取KOH-碱溶液浓度11%、碱液加入量170mL、皂化温度50℃、皂化时间2h的实际条件时，叶黄素的含量实际值达到15.64mg/g。 　　关键词：叶黄素；超声波皂化；响应面 　　万寿菊原产墨西哥[1]，是一种一年生草本植物，我国各地均有栽培，其花和叶可入药，有平肝清热、化痰、补血通经、去瘀生新、抗肿瘤、增强免疫力等功效[2]。它含有丰富的叶黄素，是一类含氧类胡萝卜素，分子式：C40H56O2，分子量为568.85[4]，在体内不能转换为VA，没有VA活性[5]。分子结构的碳骨架由中央多聚稀链和位于两侧的六元碳环组成，它主要有胡萝卜素类和叶黄素类两类，前者是不含氧的类胡萝卜素的总称，后者是含氧类胡萝卜素的总称，包括叶黄素、玉米黄质、α-胡萝卜素、紫黄质、隐黄质、辣椒红素等[6]。 　　早在20世纪80年代中期，西方医学界研究人员就发现：叶黄素在抗氧化、预防视网膜黄复病和白内障疾病、冠心病及人体衰老、增强机体免疫力等方面有着广泛的生物活性[7～9]。近年来，研究表明叶黄素还可预防和改善癌症、糖尿病、心血管疾病等多种慢性疾病[10～12]。鉴于叶黄素无毒安全，具有较强抗氧化、改善视力等生理功能，已被广泛应用于饲料添加剂、食品添加剂、保健食品、化妆品、医药、工业染料、水产品等行业[13]。 　　本研究采用以KOH和甲醇、异丙醇的三元混合溶剂为皂化液，同时采用超声波辅助的方法进行皂化反应得到叶黄素。在此基础上，利用响应面分析法对其提取工艺参数进行优化，得出超声波皂化叶黄素反应的最佳工艺条件，为进一步开发利用这一天然色素提供理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料与仪器 　　1.1.1 材料 　　万寿菊颗粒，由林甸县齐鑫天然产物有限公司提供；叶黄素标准样品购于Sigma公司。试剂：THF（四氢呋喃）、甲醇、KOH、无水乙醇、醋酸、正丁醇。 　　1.1.2 仪器 　　KQ5200DE超声波反应器（昆山市超声仪器有限公司）、Ⅲ性循环水真空泵（上海亚荣生化仪器厂）、RE-52A旋转蒸发仪（上海亚荣仪器厂产品 ）、FA-1004电子分析天平（上海恒平科学仪器有限公司）、U-2001紫外分光光度仪（德国耶拿分析仪器股份公司）、HWS24恒温水浴锅（上海一恒科学仪器有限公司）、FW-80万能粉碎器（北京市永光明医疗仪器厂）、DHG-9053A型电热恒温鼓风干燥箱（扬州鸿都电子有限公司）、Surveyor高效液相色谱分析仪（美国Finnigan公司）、TGL-16B高速台式离心机（上海安亭科学仪器厂）。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 工艺流程 　　叶黄素酯→超声波辅助皂化→抽滤→调PH值→提取液浓缩→离心除去上清液→真空干燥→叶黄素。 　　1.2.2 操作方法 　　精确称取叶黄素浸膏5g，加入2倍体积的四氢呋喃溶解，待溶解后，加入一定量一定浓度的KOH-碱溶液进行超声波（功率100W）皂化，皂化结束后，抽滤，用20%醋酸水溶液调pH值至中性，将滤液真空浓缩至无馏出液，离心去除上清液，收集叶黄素，真空50℃干燥24小时，得到叶黄素晶体。注意尽量避光。 　　1.2.3 测定方法 　　提取率的测定：取0.1g叶黄素用正己烷定容到25mL，用1cm比色皿以正己烷作空白在波长450nm处测定的其吸光度值。 　　叶黄素含量的计算： 　　叶黄素含量（mg/g）= 　　式中：Y为样品溶液的定容体积（mL）；A为样品的吸光度值； 　　E■■为吸光系数，为在1cm光程长的比色杯中1%（w/v）浓度溶质的理论吸收值，取值2500。 　　2 结果与分析 　　2.1 不同配比液对皂化反应的影响 　　由于甲醇、乙醇对KOH的溶解性好[14]，但对万寿菊浸提物的分散性差，且乙醇易挥发，使得皂化反应不能在较高温度下进行；异丙醇、正丁醇对万寿菊萃取物的分散性较好，但对KOH的溶解性较差。而甲醇与异丙醇的相容性好，所以选择甲醇与异丙醇的混合体系为溶剂既对KOH有很好的溶解性，又对叶黄素酯有很好的分散性，从而很好满足了皂化需要。 　　表1 不同配比液对皂化反应的影响 　　由表1可知：当甲醇和异丙醇的体积比为4：1时，叶黄素含量最多，此时异丙醇已能很好分散叶黄素酯，异丙醇用量继续增大时，叶黄素含量没有明显提高，而且进一步增大异丙醇的用量会甲醇浓度下降，不利于溶解叶黄素酯