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猴头菌多糖水提取工艺优化 　　摘要：本文对水提法提取猴头菇多糖的工艺进行研究，最后得出最优化工艺条件为：提取温度100℃、提取时间120分钟、料液比为1：18，提取次数2次。结果证实了实验室数据的可靠性，为大规模生产提供了理论依据。 　　关键词：猴头菌 多糖 水提取工艺 　　中图分类号：TQ461 文献标识码：A 文章编号：1672-5336（2013）20-0016-04 　　猴头菌属于担子菌门，猴头菌科，是一种药食两用的真菌。性平，味甘，利五脏，助消化，滋补，素有“山珍猴头，海味燕窝”之说法。猴头菌的药效成分主要有多糖、低聚糖、甾醇、脂肪酸、猴头菌素和猴头菌酮等，临床上试用于治疗胃癌、食管癌及胃十二指肠溃疡、慢性胃炎[1-2]等疾病具有较好的疗效。本研究旨在通过研究猴头菌多糖提取工艺，寻找猴头菌开发的途径，研究结果对综合开发、利用猴头菌资源具有较大的意义。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　1.1.1 猴头菌子实体 　　无极限（中国）有限公司提供95%食用酒精。 　　1.1.2 仪器设备（见图1） 　　1.2 实验方法 　　1.2.1 猴头菌多糖测定 　　精密量取1mL提取液，加入乙醇12mL，摇匀，室温放置12h，取出，离心，倾去上清液，沉淀用2mL95%乙醇溶液洗涤1次，离心。用水将上述不溶物转移至50mL容量瓶中，水浴溶解，加水稀释至刻度，摇匀，稀释十倍，此溶液为样品测定液。 　　分别吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL标准葡萄糖溶液（50mg/mL）置玻璃试管中，用蒸馏水补至1mL，再加入5%苯酚溶液0.5mL，混匀后迅速加入2.5mL浓硫酸，使用漩涡振荡器使反应液充分混合，然后将试管置于沸水浴中反应15min，490nm测吸光度，以葡萄糖质量浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。根据样品测定的吸光度值查找标准曲线计算多糖的量。 　　1.2.2 不同提取条件分别对多糖得率和含量的影响 　　料液比：多糖的水提取温度100℃，提取时间2h，提取一次，分别以料液比为1：9、1：12、1：15、1：18、1：21提取；提取时间：固定多糖的提取温度为100℃，根据第一次试验结果，料液比选1：18，提取一次，分别于不同提取时间1h、1.5h、2h、2.5h、3h提取（三个重复）；提取温度：料液比选1：18，时间选2h，提取一次，分别于不同提取温度60℃、70℃、80℃、90℃、100℃提取（三个重复）；提取次数：固定多糖的提取温度为100℃，提取时间2h，料液比为1：18，我们选取提取次数1次、2次、3次进行提取（三个重复）。 　　提取方法：称取15g猴头菌干→加入定量蒸馏水浸泡0.5h，在一定的温度、料液比下浸提一定时间→提取液用滤布过滤，滤液浓缩到50mL，12000r/min离心，将上清液定容到50mL，取5mL该上清冻干，算得率；取1mL测总糖含量，再取1mL加入12mL无水乙醇，醇沉12h；4000r/min，离心15min，沉淀用95%乙醇清洗，溶于蒸馏水，定容到25mL，取样，稀释，用苯酚硫酸法测多糖含量。 　　提取率计算方法：得率（%）=（m*10）/15100%，m：50mL上清液冻干后的质量，单位为g。 　　1.2.3 提取物HPLC分析方法 　　缓冲液的配制：用去离子水配制缓冲液，其中NaH2PO4和NaNO3的浓度分别为0.1mol/L和0.3mol/L，用1mol/L的NaOH溶液将pH值调到7.0，再加10mL的10mg/mLNaN2以防腐，所配制的溶液用0.45μm的滤膜过滤，并用超声或真空脱气。 　　多糖分子量分布分析：取待分析样品2mg于1mL缓冲液中，充分溶解，于10000r/min（15000g）离心20min，吸取上清液至2mL色谱瓶中准备上样分析。 　　HPLC的具体分析测试条件如下：TSK PWXL 4000和TSK PWXL3000串联使用（或是TSK PWXL 5000）；示差检测器检测，流速为0.5mL/min，柱温为35±0.1℃，取20μL上样。在凝胶柱的分子量分析范围内，取葡聚糖标准品Dextran T-5，12，25，50，80，150，270和410各2mg，溶于1mL缓冲液中，10000r/min离心20min。按样品上样方法上样，根据样品的保留时间计算分子量分布。 　　2 实验结果与分析 　　2.1 不同料液比提取多糖的结果 　　试验采用五种料液比进行多糖的提取，分别为1：9、1：12、1：15、1：18、1：21。试验结果表明，随着提取料液比的增加，多糖含量和得率也增高（图2），但在1：18时达到最高，到1：21又下降。分析原因，料液比对多糖的提取是有影响的，料液比低不利于多糖的提取，料液比太高会提出其它的成分，也会影响其含量。