阿胶化皮过程总氮含量快速测定以及化皮过程终点判断方法.docVIP

阿胶化皮过程总氮含量快速测定以及化皮过程终点判断方法 　　[摘要] 化皮过程是阿胶生产中的重要环节，该文采用近红外光谱技术结合多变量数据分析快速测定驴皮化皮液中的总氮含量，并提出化皮过程终点判断方法。以近红外透反射光谱采集模式采集化皮液光谱，以凯氏定氮法测定值为参比，采用偏最小二乘回归建立化皮液近红外光谱与其总氮含量间的校正模型，并对建模波段及主成分数等模型参数进行优选。使用所建定量模型快速测定化皮液的总氮含量，并以其为依据确定化皮次数。所建总氮定量模型性能良好，验证集相关系数和预测误差均方根分别为0.991 3，0.807 g?L-1。根据模型测得的总氮含量以及预设的总氮含量限，可以快速判断化皮过程的进度，确定合理的化皮次数。结果表明，近红外透反射光谱可快速准确地测定化皮液中的总氮含量并判断化皮工艺终点，避免了不合理的化皮次数带来的能耗或原料浪费。 　　[关键词] 近红外透反射光谱； 阿胶化皮工艺； 总氮； 终点判断 　　阿胶（Asini Corii Colla）为马科动物驴Equus asinus L.的干皮或鲜皮经去毛、煎煮、浓缩制成的固体胶，具有促进造血、抑瘤增效、提高免疫力等多种保健功效[1-2]。阿胶的主要成分为胶原蛋白及其水解产物肽类和氨基酸，约占其干重的4/5。药典规定阿胶的制备过程需经过包括驴皮预处理、焯皮、化皮、提沫、浓缩、晾胶及后处理等数十道工序[3]，其中化皮（分次水煎）是阿胶生产过程中关键的工序之一。化皮是指在高温高压的条件下原料驴皮结缔组织中的胶原纤维在受热后改疏水性为水溶性，逐渐溶入水中并伴有不同程度水解的过程[4]。目前，对化皮工艺的质量控制方式尚较为粗放：主要由有经验的工人根据原料驴皮的质地，预估该批次原料中蛋白质的含量以及所需的化皮次数。这种基于经验的方式具有主观性及不确定性，同时也缺乏中间体化皮液中实际蛋白提取量的量化指标，难以确保批次间化皮液的质量一致性。根据化皮工艺的上述现状，本文选择总氮含量这一能够综合反映溶液中蛋白质及其水解产物浓度的指标作为评判化皮过程的质控指标。 　　近红外光谱主要是含氢基团（C-H， N-H， O-H）的倍频与合频吸收区间。通过采集样品的近红外光谱图，可以获得样品中含氢基团的特征信息。近年来，近红外光谱技术与化学计量学相结合已被应用于中药生产中各个阶段的质量控制，包括原料药材[5-6]、过程中间体[7-9]及成品[10]，但近红外光谱技术在胶类中药生产过程中的应用研究尚未见报道。 　　以阿胶的化皮过程为研究对象，建立化皮液总氮含量与近红外光谱之间的定量校正模型用于对化皮液的快速分析，迅速、准确地反映化皮液中蛋白质的溶出信息，并以总氮含量为依据判断化皮过程的终点。 　　1 材料 　　Antaris II型傅立叶变换近红外光谱仪（美国Thermo Fisher公司），配有SabIR透反射配件和Result光谱采集软件；Kjeltec 8400全自动凯氏定氮仪（丹麦FOSS公司）。 　　样品集中包括生产过程样品与实验室模拟样品，其中生产过程样品由山东东阿阿胶股份有限公司提供，为2013年4月在生产装置中取得的化皮液样品，批号为2013040201～2013040902。总氮含量参考值采用凯氏定氮法测得。样品总氮含量参考值数据均由厂方提供。 　　2 方法 　　2.1 样品收集 化皮工艺操作如下：将原料驴皮投入化皮蒸球中，加适当倍量的水，加热至指定的化皮温度后保温若干小时，放出化皮液，记为第1遍化皮液；之后再向蒸球中加入等量的水，加热至指定温度后放出化皮液，重复此过程1至2次，记为第2，3遍化皮液。如此获得实际生产过程中的化皮液样品共78份。另收集上述各批次化皮后的渣料，加2倍量水煮沸30 min，所得化皮液作为第4遍化皮的样品，如此获得实验室模拟的第4遍化皮液样品共26份。实际化皮过程样品及实验室模拟的化皮液样品共计104份。化皮液样品于4 ℃冰箱中保存。 　　2.2 光谱采集 采用透反射模式采集化皮液样品的近红外光谱图。光谱采集参数如下：以仪器内置背景为参比，光谱采集波数范围4 000～10 000 cm-1，分辨率4.0 cm-1，扫描次数128次。采集化皮液样品光谱前从冰箱中取出并平衡至室温，光谱采集过程中环境温度为（25±1） ℃。化皮液样品近红外光谱见图1。 　　2.3 模型建立及参数优化 采用含量梯度法将样品集划分为校正集和验证集，分别用于建立定量模型及验证模型的预测能力。具体划分方法是将全部样品按总氮含量由高到低排列，每3个样品中取第1和第3个样品划入校正集，中间样品划归验证集：这样的划分方式既保证了校正集样本和验证集样本含量分布的均匀性，又使得校正集样本的浓度范围能够涵盖验证集样本的浓度范围，有助于建立稳健的预测模型。划分样品集之后，运用偏最小二乘回