农药生物测定课件.ppt

目前比较成熟的组织筛选法有： 适用于水稻纹枯病、蔬菜菌核病的“蚕豆叶片法” 适用于稻瘟病的“叶鞘内侧接种法” 适用于玉米弯孢霉叶斑病的“玉米叶段法” 用来观察药剂对真菌各生长阶段作用的“洋葱鳞片法” 针对黄瓜灰霉病新药剂筛选的“子叶筛选法” 适用于霜霉病的“叶片漂浮法” 适用于稻白叶枯病的“喷菌法” 针对细菌性白菜软腐病的“萝卜块根法” 适用于柑橘树脂病的“离体叶片法” 适用于抗病毒剂筛选的“局部病斑法”及“叶片漂浮法” 不管是离体法、活体法还是组织筛选法都有各自的优缺点，要针对病菌的侵染特点加以选择，必要时还要结合使用，综合各种方法的优势。如日本三共农药研究所在采用活体法筛选出有效的化合物后，往往又采用离体的方法来寻找毒力更强的化合物，这是一种活体－离体－活体的筛选模式。 实验 杀菌剂的生物测定--生长速率法 一、实验目的 学习并掌握杀菌剂的生物测定方法之一--生长速率法 二、实验原理 生长速率法是杀菌剂毒力测定的常规方法之一，适用于不长孢子而菌丝生长较快的真菌，是通过菌落生长的速度快慢来衡量药剂的毒力大小 生长速率法又叫含毒介质法，它是将供试药剂与培养基混合，以培养基上菌落的生长速度来衡量化合物的毒力大小。一般多用于那些不产孢子或孢子量少而菌丝较密的真菌 菌落生长速率的表示方法 菌落达到一个给定的大小所需要的时间（天或小时） 在单位时间内菌落直径的大小 生长速率法常用的菌种 棉花枯萎病菌（Fusarium oxysporium） 苹果腐烂病菌（Valsa mali） 小麦纹枯病菌（Rhzoctonia solani ） 葡萄白腐病菌（Coniothyrium diplodiella） 小麦全蚀病菌（Gaeumannomyces graminis） 辣椒疫霉病菌（Phytophthora capsici） 三、试剂和仪器设备 高压灭菌锅、超净工作台、酒精灯、接种针、纱布、吸管、消毒培养皿、打孔器、无菌小烧杯 PDA培养基 病原菌（苹果腐烂病菌） 供试杀菌剂(多菌灵) 四、实验步骤 将培养基加热溶化，冷却至45-50℃，加入供试药液制成含药液的培养基，并分别倒入培养皿中冷却 以无菌操作手续，用打孔器打取圆形菌块后用接种针挑至培养皿中央，然后将培养皿置于培养箱（27℃）中培养即可 于处理后不同时间观察测定菌丝的生长情况 五、实验数据及其处理 纯生长量=菌落平均直径-菌饼直径 抑菌率（%）=[(对照菌落纯生长量-处理菌落纯生长量/对照纯生长量]×100% 药剂 浓度（mg/L） 浓度对数 菌落直径（mm） 抑制（%） 机 率 值 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ 平均 50%多菌灵对苹果腐烂病菌的抑制作用(生长速率法) 六、问题讨论 根据实验结果比较各种供试药剂之间对病原菌菌丝生长的抑制作用 除草剂生物测定方法 除草剂的生物测定广义的包括了实验室、温室和大田三个试验层次,而狭义的仅主要指前两者,后者则为田间药效评价。 二 、供试昆虫的准备 为了使毒力测定的结果可靠稳定，除了严格控制每次试验过程中的条件外，杀虫剂毒力测定要求所用试虫群体质量的均匀一致，除饲养的试虫外，从野外采集的田间试虫，应进行分离和严格挑选，如虫期、龄期、性别等，使之达到群体质量均匀，尽可能地减少试验误差，保证获得满意的结果。移虫前应该净手及消毒，避免药剂或有害病菌污染虫体；操作时要细心，不要碰伤虫体。 1 移取试虫的方法 毒力测定时，首先应将试虫从饲养缸（笼）中快速移出，且不能损伤虫体。根据毒力测定所用的昆虫种类、个体大小、生活习性和特点不同，以及移取的工具和方法的差异可分为机械法，化学法和趋光法。 1.1机械法 对于菜青虫、斜纹夜娥等活动能力不大或有假死性的试虫，可采用最简单的取虫工具，如镊子来移取。而一些体型小、体软或易碰伤的试虫，如蚜虫、红蜘蛛、小菜蛾等，可用毛笔移取。 一些活动能力不大、微小或易受机械伤害的目标昆虫（如杂拟谷盗、米象、蚜虫和虫卵等）。此类试虫用上述方法移取困难，费时或易造成伤害，可用真空或喉管空气注射吸虫法移取，既方便又快速。 1.2麻醉法 移取飞翔或活动能力强的试虫时，常采用麻醉法处理，以达到试虫混匀移取的要求。但是麻醉处理对昆虫的生理状态有一定影响，因而要注意麻醉时间，以免对试虫造成伤害。 1.2.1 二氧化碳法 用CO2或CO2与空气（3：1）混合气体麻醉法，可用于大多数试虫。可在一个密闭容器里放入试虫，然后通入二氧化碳即可进行麻醉。 1.2.2 挥发蒸气法 在密闭广口玻璃容器（如干燥器）中，放入三氯甲烷与酒精（1：1）、三氯甲烷与乙醚（1：1）、乙醚与酒精（1：1）或乙醚等药品，进行麻醉。麻醉时间随各种试虫群体对麻醉剂的敏感性和所要求的麻醉程度不同而定，如家蝇的麻醉时间一般在4min以内。 1.2.3