探讨循环酶法测定同型半胱氨酸测定在临床上应用.docVIP

探讨循环酶法测定同型半胱氨酸测定在临床上应用 　　【摘要】 目的 探讨循环酶法（Enzymaticcyclingassay）测定血清同型半胱氨酸水平的临床应用价值。方法 氧化型HCY被转化成游离HCY游离HCY在CBS催化下和丝氨酸反应生成L-胱硫醚。L-胱硫醚在CBL催化下又生成HCY、丙酮酸和NH3。该循环反应生成的丙酮酸可以用乳酸脱氢酶LDH和NADH检测到，NADH转变生成NAD+的速率与样品中的HCY含量正比。在全自动奥林巴斯上测得结果。结论 同型半胱氨酸检测试剂盒用于人血清或血浆中同型半胱氨酸含量的测定，用于心血管疾病、糖尿病、肾病、中风、老年痴呆症及妊娠相关疾病的体外诊断。 　　【关键词】 同型半胱氨酸；循环酶法；测定 　　doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2013.11.821 文章编号：1004-7484（2013）-11-6798-02 　　同型半胱氨酸是人体内含硫氨基酸的一个重要的代谢中间产物，可能是动漫粥样硬化等心血管疾病发病的一个独立危险因子。血浆中同型半胱氨酸含量与遗传因素、营养因素、雌激素水平、年龄因素等有关，与同型半胱氨酸代谢有关的N5N10-亚甲基四氢叶酸还原酶和胱硫醚-β-合成酶的基因突变，酶活性下降，也可引起高同型半胱氨酸血症。是诱发心血管疾病的一个独立危险因素。主要用于心血管疾病、糖尿病、肾病、中风、老年痴呆症及妊娠相关疾病的体外诊断。 　　1 资料与方法 　　1.1 检验原理 氧化型HCY被转化成游离HCY游离HCY在CBS催化下和丝氨酸反应生成L-胱硫醚。L-胱硫醚在CBL催化下又生成HCY、丙酮酸和NH3.该循环反应生成的丙酮酸可以用乳酸脱氢酶LDH和NADH检测到，NADH转变生成NAD+的速率与样品中的HCY含量正比。 　　1.2 样本要求 样品为空腹血清、血浆（EDTA，肝素、抗凝。样品应在低温条件下运输保存，样品采集后需冷藏并迅速离心。如果检测延后需冷藏血清，样本密封2-8摄氏度下可保存48小时。 　　1.3 检验方法的局限性 ①几种铁试剂中的羟胺可能会自试剂探测器或反应试管中带出并导致错误的低结果。奥林巴斯铁试剂不含羟胺。试剂探测器将R1携带进脂肪酶实验中，可造成脂肪酶结果虚假升高。用吸管吸取R1后，先使用针洗液，再吸取脂肪酶R1和R2，可避免这种问题的出现。②血清中同型半胱氨酸检测试剂盒（循环酶法）的测定只是临床医师对患者进行诊断的指标之一，临床医师还要根据患者的体症、病史以及其它的诊断项目、诊断手段进行综合判断。 　　2 同型半胱氨酸的代谢过程 　　人体内同型半胱氨酸是蛋氨酸脱甲基后的产物，蛋氨酸是重要的“一碳单位”供体，蛋氨酸在S-腺苷蛋氨酸合成酶崔化下与ATP结合生成S-腺苷蛋酸（SAM），SAM在供出甲基后，水解生成同型半胱氨酸和腺苷。相反，体内的同型半胱氨酸在蛋氨酸合成酶的作用下，以维生素B12为辅助因子，接受N5-甲基四氢叶酸携带的甲基，再形成蛋氨酸。此反应必须有N5-甲基叶酸作为甲基的供体，N5-甲基四氨叶酸是四氢叶酸经N5N10-亚甲基四氢叶酸还原酶催化而产生的。同型半胱氨酸另一代谢途径是在胱硫醚-β-合成酶催化下，与丝氨酸缩合成胱硫醚。因此，血浆同型半胱氨酸浓度的升高与遗传因素和营养因素有关，MTHFR和CBS基因发生突变，导致酶活性降低，产生高同型半胱氨。 　　3 血液同型半胱氨酸浓度变化的临床意义 　　3.1 本世纪60年代末期，一些学者注意到患有遗传性高胱氨酸尿症的病人，大多数伴有亚临床心血管病。1976年，Wichen等通过流行病学调查提出同型半胱氨酸是心血管病人一个独立危险因素，但一直未受到人们重视。近年来，通过分子水平研究同型半胱氨酸在心血管发病中的作用已重新引起人们的关注。动物试验表明，应用3%蛋氨酸饮食长期喂养家兔，诱发同型半胱氨酸血症。家兔血中甘油三酯、游离脂肪酸、脂质过氧化物含量均明显升高，病理检查表明主动脉脂肪大量沉积，并发生动脉粥样硬化。Glueck等报道，他们对高血脂病人进行分析，18例患者同时伴有血浆同型半胱氨酸含量升高。其中13人患有动脉粥样硬化，发病率为72%，远高于血浆同型半胱氨酸含量正常的高血脂患者。在18例高同型半胱氨酸血症患者的直系亲属中动脉粥样硬化的发病率可达78%。目前关于高同型半胱氨酸血症诱发动脉粥样硬化的机制尚不了解。可能有多方面因素起作用。田学军等报道，同型半胱氨酸可以促进大鼠血管平滑肌细胞增殖，诱导血管平滑肌细胞中新的mRNA生成。另外，同型半胱氨酸可以抑制内皮细胞增殖，促进氧自由基的生成，加速低密度脂蛋白的氧化，并可激活血小板的粘附和聚集。总之，同型半胱氨酸是诱发心血管疾病的一个独立危险因素。 　　3.2 其他一些疾病，如肾功能障碍患者常伴有血同型半胱氨酸含量升高，机