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正交试验设计对苦菜总酚提取工艺优化 　　摘要：通过单因素试验和正交试验，研究了不同因素对苦菜（Sonchus oleraceus L.）总酚提取率的影响，确定了最佳提取工艺参数。结果表明，对苦菜总酚提取率影响程度由大到小依次为提取时间、酸性乙醇体积分数、料液比；苦菜总酚提取的最佳工艺参数为A1B3C1，即酸性乙醇体积分数60%（V/V），提取时间3 h，料液比1∶20（g∶mL）。在此条件下，苦菜总酚提取率可达9.08 mg/g。 　　关键词：苦菜（Sonchus oleraceus L.）；总酚；提取；正交设计 　　中图分类号：S647；Q819 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2014）03-0644-03 　　苦菜（Sonchus oleraceus L.）为菊科（Compositae）苦苣属（Sonchus）一年生或两年生草本植物，又名苦荬菜、苣荬菜、苦苣菜。主要分布在我国东北、西北、华北、华中、华南等地区，生长于山地草坡、路边及田野间，资源十分丰富[1]。苦菜含有多种营养和功能成分，是一种药食同源植物。长期食用苦菜及其制品可预防肿瘤、养血保肝、消炎利胆、降压降脂等[2]。苦菜可全株入药，味苦，性寒。具有清热解毒，凉血止血等作用。主治肠炎、痢疾、咽喉肿痛、吐血等病症[3]。苦菜含有黄酮、生物碱、多糖、酚酸、内酯、萜类及氨基酸等对人体有益的有效成分，具有开发价值[4-9]。 　　总酚作为苦菜重要的次生代谢产物鲜见报道，大量的研究已经证实植物总酚具有抑菌、抗氧化、抗癌等多种生理功能[10]。本研究对苦菜总酚提取工艺进行了优化研究，旨在为苦菜资源的开发利用提供参考。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料和试剂 　　供试苦菜：2013年4月采自渭南师范学院土操场，主要为生长茂盛的茎叶部位，50 ℃烘干粉碎，过40目筛备用。 　　主要试剂：没食子酸标品（中国药品生物制品检定所）；Folin-酚试剂（上海荔达生物科技有限公司）；其余试剂均为分析纯。 　　1.2 主要仪器设备 　　7200型可见分光光度计（上海分析仪器总厂）；恒温水浴锅（上海爱朗仪器有限公司）；DZF-150型恒温鼓风干燥箱（郑州长城科工贸易有限公司）；RE-52AA型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；YP2002 型电子天平（上海越平科学仪器有限公司）。 　　1.3 试验方法 　　准确称取苦菜粉末10 g，按照料液比1∶20（g∶mL，下同）加入不同的提取溶剂（去离子水、50%甲醇、50%乙醇、用HCl调pH为1～2的50%酸性甲醇和50%酸性乙醇）在50 ℃加热回流提取 2 h 后离心，真空抽滤，提取2次， 将2 次 提 取 过 滤 液合并，以3 000 r/min离心10 min，取上清液，在 50 ℃下旋转蒸发，冷却，定容至 50 mL 备用。取0.5 mL样液进行总酚含量的测定。 　　1.4 标准曲线制作方法 　　标准曲线的制作按照参考文献[11]并稍作修改。分别准确吸取质量浓度为200 μg/mL没食子酸标准溶液0、0.04、0.06、0.08、0.10、0.12、0.14 mL于10 mL 具塞试管中，加入 Folin-Ciocalteu试剂 1.80 mL混匀，3 min后加入2 mL Na2CO3（20 g/100 mL），用去离子水定容至5 mL，置暗室反应40 min。待反应结束后于760 nm处测定吸光度。每个试样平行测定3次，取平均值。以没食子酸浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。 　　1.5 单因素试验 　　设计单因素试验分别考察不同种类溶剂、乙醇浓度、提取时间、料液比对苦菜总酚提取率的影响。①选取去离子水、50%甲醇、50%乙醇、50%酸性甲醇和50%酸性乙醇5种不同溶剂；②以酸性乙醇为提取溶剂，分别以不同体积分数酸性乙醇（40%、50%、60%、70%、80%）进行提取，料液比1∶10，提取时间2 h；③以70%酸性乙醇为提取溶剂，分别以提取时间（1、2、3、4、5 h）进行试验，料液比1∶10；④以70%酸性乙醇为提取溶剂，提取时间3 h，分别以不同料液比（1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50）进行试验。 　　1.6 正交试验 　　在单因素试验的基础上，选择酸性乙醇体积分数、提取时间、料液比3个因素，每个因素3个水平进行正交试验（表1），优化苦菜总酚提取的工艺参数。 　　2 结果与分析 　　2.1 没食子酸标准曲线 　　试验得到没食子酸的标准曲线见图1，吸光度（y）与没食子酸含量（x）关系曲线的回归方程为y=0.109x+0.042 3，R2=0.998 7。 　　2.2 单因素试验结果 　　5种不同溶剂对苦菜总酚提取率的影响见图2。从图2中可以看出，50%的甲醇和乙醇处理苦菜总酚的提取率相近，