免疫学技术 绪论 抗原的提取与制备.ppt

处理与粉碎 组织粉碎：机械、生物 细胞破碎：物理、化学、生物 蛋白质分离 选择性沉淀：盐析 有机溶剂沉淀 水溶性非离子型聚合物沉淀 透析技术： 超滤技术： 单一组分提取 层析技术：凝胶过滤 离子交换 亲和层析 离心技术：差速离心 密度梯度离心 电泳技术：电泳洗脱 等电聚焦 凝胶层析（分子筛） 离子交换层析 + + + — — — — — — — + + + + + + + + — — + + + — — + + 亲和层析 抗原纯度鉴定 方法：层析性质测定 电泳法 免疫法 指标：电泳纯 免疫纯 第三节 半抗原免疫原制备的方法 一、载体的选择 二、半抗原与载体的联接 载体的选择 蛋白质载体：BSA、HAS、OVA、KLH 聚合多肽载体：多聚赖氨酸 高分子聚合物载体：PVP、羧甲基纤维素 半抗原与载体的联接 1、连接方式：物理法（吸附） 化学法 2、化学连接方法： 直接联接法： 间接联接法： 半抗原与载体直接联接 碳化二亚胺法 蛋白质-COO— + R-N+=CN-R` H-N+-R 蛋白质-COO-C-NH-R` + 半抗原-NH2 O 蛋白质-C-NH-半抗原 + R-NH-CO-NH R` 半抗原与载体直接联接 戊二醛法 蛋白质- NH2 + 半抗原-NH2 + COH-（CH2 ） 3 - COH 蛋白质-N=CH-（CH2 ） 3 – CH=N-半抗原 半抗原与载体直接联接 氯甲酸异丁酯法 半抗原-COOH + Cl-COO-CH2 CH（CH3）2 O O 半抗原-C-O-C-O-CH2CH（CH3）2 + 蛋白质- NH2 半抗原-CO- NH -蛋白质 + HO-CH2CH（CH3）2 半抗原与载体间接联接 琥珀酸酐法 O O 半抗原-CH2 –OH + C-O-C CH3 CH3 O 半抗原-CH2 –O-C-(CH2 ) 2-COOH 半抗原与载体间接联接 O-（羟甲基）羟胺法 半抗原-C=O +H2 N-O- CH2 - COOH 半抗原-C=N-O- CH2 - COOH 半抗原与载体间接联接 一氯醋酸钠法 半抗原- - OH + Cl- CH2 - COONa 半抗原- - CH2 - COOH 半抗原与载体间接联接 重氮化的对氨基苯甲酸法 HOOC- -NH2 + NaNO2 HOOC- -N=N 半抗原- - OH + HOOC- -N=N 半抗原- -N=N- -COOH OH 本章小结 1、免疫学技术的应用范畴 2、免疫学的基本概念 3、抗原抗体反应的原理、特点、影响因素 4、抗原制备的方法 思考题 1、免疫学技术的应用范畴有哪些？ 2、体外抗原抗体反应有哪些特点？ 3、可溶性