2017_2018学年高中生物专题5DNA和蛋白质技术5.1DNA的粗提取与鉴定课件新人教版选修120170905230.pptVIP

合作探究 自主预习 合作探究 自主预习 自主预习 合作探究 自主预习 合作探究 自主预习 目标导航 预习导引 1.能正确选择材料对植物或动物组织中的DNA进行粗提取。 2.能说出DNA的物理、化学性质。 3.能记住DNA粗提取与鉴定的原理。 目标导航 预习导引 一 二 三 四 一、DNA的提取 1.提取生物大分子的基本思路 选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。对于DNA的粗提取而言,就是要利用DNA与 RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异,提取DNA,去除其他成分。 目标导航 预习导引 一 二 三 四 2.DNA粗提取的原理 (1)DNA的溶解性 DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同,利用这一特点,选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解,而使杂质沉淀,或者相反,以达到分离目的。 在物质的量浓度为0.14 mol/L的NaCl溶液中,DNA的溶解度最小。? 此外,DNA不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些蛋白质能溶于酒精溶液。利用这一原理,可以将DNA与蛋白质进一步分离。 (2)DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 蛋白酶能水解蛋白质,但是对DNA没有影响。大多数蛋白质不能忍受60~80 ℃的高温,而DNA在80 ℃以上才会变性。洗涤剂能够瓦解细胞膜,但对DNA没有影响。 目标导航 预习导引 一 二 三 四 二、DNA的鉴定 在沸水浴的条件下,DNA与二苯胺反应呈现蓝色,因此二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 目标导航 预习导引 一 二 三 四 三、实验设计 1.实验材料的选取 原则上,凡是含有DNA的生物材料都可以考虑,但是,选用 DNA含量相对较高的生物组织,成功的可能性更大。 生活在牧区的人们,采集牛、羊和马血比较方便,他们用牛、羊、马血作为提取DNA的实验材料合适吗?为什么? 提示:不合适。因为哺乳动物成熟的红细胞中无细胞核,而DNA主要存在于细胞核中,血液中白细胞和淋巴细胞数目少,因此DNA含量少,在实验中很难提取到。 目标导航 预习导引 一 二 三 四 2.破碎细胞,获取含DNA的滤液 动物细胞的破碎比较容易,以鸡血为例,在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水,同时用玻璃棒搅拌,过滤后收集滤液即可。如果实验材料是植物细胞,需要先用洗涤剂溶解细胞膜。例如,提取洋葱的DNA时,在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐,进行充分的搅拌和研磨,过滤后收集研磨液。 为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂? 提示:鸡血细胞在蒸馏水中会发生渗透吸水,以致破裂。 目标导航 预习导引 一 二 三 四 3.去除滤液中的杂质 最初获得的DNA滤液含有蛋白质、脂质等杂质,需要进一步提纯DNA。 方案一:利用DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度的不同,在滤液中加入NaCl,使NaCl溶液物质的量浓度为2 mol/L,过滤除去不溶的杂质;再调节NaCl溶液物质的量浓度为 0.14 mol/L,析出DNA,过滤去除溶液中的杂质;再用物质的量浓度为2 mol/L的NaCl溶液溶解DNA。? 方案二:利用蛋白酶分解蛋白质,不分解DNA的特点,在滤液中加入嫩肉粉,嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能够分解蛋白质。 方案三:利用蛋白质和DNA的变性温度不同的特点,将滤液放在 60~75 ℃的恒温水浴箱中保温10~15 min,过滤获得DNA滤液。 目标导航 预习导引 一 二 三 四 4.DNA的析出与鉴定 将处理后的溶液过滤,加入与滤液体积相等的、冷却的酒精溶液(体积分数为95%),静置2~3 min,溶液中会出现白色丝状物,这就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌,卷起丝状物,并用滤纸吸去上面的水分。 取两支20 mL的试管,各加入物质的量浓度为2 mol/L 的NaCl溶液5 mL,将丝状物放入其中一支试管中,用玻璃棒搅拌,使丝状物溶解。然后,向两支试管中各加入4 mL 的二苯胺试剂。混合均匀后,将试管置于沸水中加热5 min,待试管冷却后,比较两支试管中溶液颜色的变化,看看溶解有DNA的溶液是否变蓝。? 目标导航 预习导引 一 二 三 四 四、操作提示 1.以血液为实验材料时,每100 mL血液中需要加入3 g柠檬酸钠,防止血液凝固。 2.加入洗涤剂后,动作要轻缓、柔和,否则容易产生大量的泡沫,不利于后续步骤的操作。加入酒精和用玻璃棒搅拌时,动作要轻缓,以免加剧DNA分子的断裂,导致DNA分子不能形成絮状沉淀。 3.二苯胺试剂要现配现用,否则会影响鉴定的效果。 知识梳理 典例透析 一 二 一、DNA粗提取的原理 知识梳理 典例透析 一 二 知识梳理 典例透析 一 二 二、实验成功的关键及注意事项 1.实验材料选用鸡血细胞液,而不用鸡全血的主要原因是遗传物质DNA主要存在于血细胞的细胞核内。 2.盛放鸡血细胞液的