浅谈导向溶栓研究的某些进展.docVIP

使用前删除此我爱浪漫樱花文档主页： HYPERLINK /mtl168168 /mtl168168，分享文档快乐生活快乐无阻PAGE PAGE 9浅谈　　早期溶栓治疗，可以缩小心肌梗塞面积、维护左室功能、降低死亡率，因而成为急性心肌梗塞的标准疗法之一。然而当前应用的溶栓剂仍存在明显的缺陷，主要是特异性差，要达到完全溶解血栓的目的，常需较大剂量连续静脉给药，因而增加了全身纤维系统激活致出血的危险性。如何将栓剂特异性靶向到血栓部位，一者提高溶栓效力，二者降低全身出血等副反应，一直是该领域研究的热点，近年来，分子生物学技术的飞速发展，为解决溶栓导向性问题提供了很多有效途径，兹就这方面的研究进展作一简要综述。 　　1靶向溶栓剂的构建 　　近年来，运用分子生物学理论和基因工程技术，对现有的溶栓剂分子进行重组和修饰，通过增加纤维蛋白结合位点或将溶栓剂与特异性抗体连接，构建了很多新型的，特异的靶向溶栓剂。 　　1.1 t-pa/u-pa杂合体： t-pa和u-pa是两种主要的生理性纤溶酶原活化剂，均可通过裂解arg-val键而将纤溶酶原转变为纤溶酶，但二者又有其各自的特点。 t-pa具有对纤维蛋白特异性亲和作用，这是由于t-pa分子的环饼结构域（kringlez）带有一个赖氨酸结合位点（lbs），可介导与纤维蛋白结合；u-pa对纤维蛋白没有特异性，但对纤溶酶原具有很强的专一催化作用。为了充分利用二者的长处，agnelli等1构建了由来片t-pa a链及u-pa的丝氨酸蛋白酶部分组成的杂合体，动物体内实验表明，其溶栓效力提高了3-16倍，循环半衰期延长6-20倍。但也有些类似的杂合体并显示出纤维蛋白特异性亲和性。novokhatry等2通过差异扫描测热法（differential scanning calorimetry）研究了这种杂合蛋白分子内结构域之间的相互作用，结果显示t-pa的lbs与来自u-pa的leu144-lys157的残基结合，从而封闭了lbs，使其与纤维蛋白的亲和性减弱。 　　1.2特异性抗体靶向溶栓剂：利用单克降抗体与其相应抗原的高度特异性亲和作用来实现溶栓剂的靶向作用。一种方法是将抗体通过化学交联剂交联至溶栓剂分子上，但由于来源于动物的单克隆抗体的异体成分会引起人体的免疫反应，故近来多应用基因工程技术将编码抗体结合位点和纤溶酶原激活剂催化位点的两种基因杂交后表达出融合蛋白，这样可以以人的免疫球蛋白代替大部分抗体的异体结构，减少免疫反应3。holvoet等4应用基因重组技术构建了两个重组的杂合分子：k12g0s32和k12g2s32，前者是由scu-pa的低分子量衍生物（ala132→leu441）与纤维蛋白片段d-二聚体特异性单克隆抗体的可变区片段fv组成的杂合分子；后者是用glu取体asn88，从而使fv脱糖基化。体内外溶栓实验表明：k12g0s32的溶栓效力较rscu-pa提高了10倍，而k12g2s32提高了2倍，但k12g2s32的血浆半衰期较rscu-pa延长了4倍。提示这种杂合的抗体靶向性pa不仅可增加特异性溶栓效力，而且可减少清除率。 　　此外，大量研究证明，血管紧张素转移酶（ace）的单克隆抗体静脉注射后能积聚在多种动物的肺部。muzykanktor等5根据一特性，使用streptavidin作用交联剂，将scu-pa、t-pa及sk分别与抗ace单克隆抗体交联，动物体内实验表明，这些交联物对肺血管有特异靶向性，并且延长了在肺血管床滞留的时间，为肺栓塞的纤溶治疗提供了一个研究基础。 　　1.3 t-pa/p-selectin融合蛋白：p-selectin是血管粘附蛋白选择素家族中的成员之一，是一种分子量为140kd的糖蛋白。p-selectin主要存在于血小板的a颗粒及内皮细胞的weibel-palade小体中，内皮细胞及血小板受环境刺激活化时，p-selectin迅速转移到细胞表面，在血栓形成初期的白细胞贴壁流动中起着非常重要的作用。p-selectin的配基主要存在于白细胞，单核细胞及某些淋巴细胞表面。fujise等应用基因工程技术表达出含t-pa及p-selectin的融合蛋白，体内溶栓实验表明，该杂合分子具备与t-pa一样的溶栓活性，而且保存了p-selectin配基结合的能力，提示这种杂合蛋白可能提供一种靶向t-pa到血栓区域的有效方法。 　　1.4 rscu-pa/av杂合体：annexin(av)是从人胎盘中纯化 的一种抗凝蛋白，在ca2+的存在下，其对裸露在活化血小板膜上的磷脂酰丝氨酸（ps）具有高度的亲和性，因而av可作为一种靶向剂，将溶栓剂靶向到富含血小板的血栓。无论是应用化学方法构建的av与ud交联物7，还是应用基因重组技术获得的rscu-pa/av杂合体8均获得了