11生物技术在林木育种中的.pptVIP

主要内容 组织培养 体细胞胚胎发生和人工种子 遗传标记技术在林木遗传育种中的应用 基因工程在林木育种中的应用 一、遗传标记技术在林木遗传育种中的应用 （一）、遗传标记的概念 遗传标记（genetic marker）是指可以稳定遗传的、易于识别的特殊的遗传多态性形式。 在经典遗传学中，遗传多态性是指等位基因的变异。 在现代遗传学中，遗传多态性是指基因组中任何座位上的相对差异或者是DNA序列的差异。 二、基因工程在林木育种中的应用 基因工程（genetic engineering）也叫基因操作、遗传工程，或重组体DNA技术。它是在分子遗传学的理论指导下用类似工程设计的方法，预先设计蓝图，通过DNA拼接技术，将生物的某个基因通过基因载体运送到另一种生物的活性细胞中，并使之无性繁殖和行使正常功能，从而创造生物新品种的遗传学技术。 标记基因在植物遗传转化过程中的作用是区分转化和非转化细胞，是筛选和鉴定转化的细胞、组织和转基因植株的有效方法。目前被广泛应用的标记基因大致可分为选择基因、报告基因两类。 5、转基因植物的鉴定以及外源基因表达的检测 转基因植株的分子检测主要包括PCR特异扩增、分子杂交技术。PCR特异扩增目的基因片段是当今用于转基因植物鉴定的所用的最简单、最常用的方法。 4、转化植物细胞的筛选 植物细胞经过目的基因转化处理后，只有少数细胞被转化，需将转化细胞与未转化细胞区分开来，并淘汰未转化的细胞，然后利用植物细胞的全能性在适当的环境条件下使转化细胞发育为转基因植株。 （二）基因工程技术在林木育种中的应用 1986年Parson等首次证实杨树可以进行遗传转化和外源基因能在树木细胞中表达。目前已有杨树、恺木、核桃、刺槐、麻栋、按树、火炬松、花旗松、欧洲赤松、白云杉、挪威云杉等10科22属35种进行遗传转化研究，获得转目的基因植株有杨树、松树、柳树、核桃等，个别已进人商业化阶段。 河北农业大学将Bt基因和慈菇蛋白酶抑制剂基因构建在一个植物表达载体上，通过根癌农杆菌介导将此表达载体上的双基因转人白杨优良杂种741杨中，获得了对杨扇舟蛾、舞毒蛾、美国白蛾等鳞翅目害虫具高抗性的植株。转基因植株的幼虫死亡率达到80％以上，存活幼虫生长发育受到明显抑制，植株生长发育未受影响，现进人商品化生产阶段。 1．抗虫基因工程 美国威斯康星麦迪逊大学等单位合作成功地将抗虫的苏云金杆菌内毒素基因和蛋白酶抑制剂基因转人白云杉树中，从而可有效地防治云杉卷叶蛾对白云杉的危害。 2．抗病基因工程 抗病基因根据其作用对象可分为：抗病毒基因、抗真菌基因和抗细菌基因。 在林业上，抗病毒基因工程研究起步较晚，目前使用的只有杨树花叶病毒外壳蛋白（PMV一CP）基因、洋李痘病毒的外壳蛋白（PPV）基因和黄瓜花叶病毒外壳蛋白（CMV一CP)基因等几种。 林木抗真菌和细菌基因研究有一定的进展。目前克隆出抗真菌性病害的基因有几丁质酶基因（Chi）和角质酶基因（Cut)，已构建了能在杨树细胞中表达的几丁质酶基因的表达系统。 * 第11章 生物技术在林木育种中的应用 遗传标记主要有形态标记（morphologicalmarkers)、细胞学标记（cytological markers )、同工酶标记( isozyme markers）和分子标记( molecular markers)。 理想的分子标记： ①多态性高，自然界存在着许多等位变异，不需专门创造特殊的遗传材料； ②表现共显性，能够鉴别出纯合基因型和杂合基因型，提供完整的遗传信息； ③在基因组中大量存在且分布均匀； ④选择中性，即无基因多效性，不影响目标性状的表达；⑤检测手段简单、快速，容易观测记载，成本低； ⑥实验重复性好。 1．形态标记 形态标记即植物的外部特征和特性。 广义的形态标记还包括借助简单测试即可识别的某些形状如生理特性、生殖特性、抗病虫性等。 形态标记的特点是简单直观，通过细心观察从表型上就可将不同个体区分开来，长期以来用于林木遗传种质资源鉴定及品种选育。 形态鉴定需额外占用土地，标记位点数少，周期长，花费大，易受环境、发育阶段、生理因素和人为因素的影响，准确性差，容易出现漏选、错选，而且需要有丰富的实践经验和知识，一般用于对大量材料进行初步筛选。 2．细胞学标记 细胞学标记能明确显示遗传多态性的细胞学特征。染色体的结构和数量特征是常见的细胞学标记，它们分别反映了染色体结构上和数量上的遗传多态性。 带型特征是指染色体经特殊染色显带后，带的颜色深浅、宽窄和位置顺序等，由此可以反映染色体上常染色质和异染色质的分布差异。 染色体结构特征包括染色体的核型和带型。 核型特征是指染色体的长度、形态、着丝粒的位置和随体有无等，由此可以反映染色体的缺失、重复、倒位和易位等遗传变异。 染色体数量特征是指细