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薄荷挥发油的提取实验报告 薄荷挥发油的提取与应用研究 摘要：文章以薄荷为材料，采用水蒸汽蒸馏法提取薄荷挥发油，分别考察了蒸馏时间和加水量两种因素对挥发油提取率的影响。并在接种了大肠杆菌的平板中分别放入沾了四个不同浓度挥发油和无菌水的滤纸片，置于30℃温箱中培养24小时，证明薄荷挥发油对大肠杆菌具有抑菌作用。 关键词：挥发油；薄荷；水蒸汽蒸馏法 中图分类号：tq461 文献标识码：a 文章编号：1674-0432（2012）-11-0054-1 薄荷（peppermint），别名野薄荷，脣形科，薄荷属。多年生芳香草本，茎直立，高30～80cm。薄荷挥发油有较强的挥发性，本实验采用水蒸汽蒸馏法，提取薄荷挥发油进行相关研究。 1 材料与方法 1.1 实验材料与试剂 薄荷、大肠杆菌及lb固体培养基。 1.2 实验仪器 电子天平，恒温水浴锅，灭菌锅，恒温振荡培养箱，无菌操作工作台等。 1.3 实验方法 本实验采用水蒸汽蒸馏法[1]提取薄荷挥发油，分别对不同蒸馏时间、不同加水量，分别对薄荷挥发油进行提取。 工艺流程：材料→阴干→粉碎→过筛→水蒸汽蒸馏→油水混合物→高速离心→移液器抽取→计算提取率→感官评价[2]。 1.4 实验步骤 1.4.1 薄荷挥发油的提取 称取50g薄荷，剪碎，研磨成泥状物，然后安装蒸馏装置，安装完毕后开始加热。控制蒸馏的时间和速度，通常以每秒1～2滴为宜。当流出液无明显油珠时，澄清透明时，便可停止蒸馏。收集锥形瓶中的乳白色的乳浊液，然后用移液枪小心将薄荷挥发油取出移至另外的三角瓶中，并向其加入无水硫酸钠，吸去油层中含有的水分，放置过夜。计算出油率。出油率按以下公式计算： 精油含量（ml/g）=测得精油量（ml）/供试品量（g），重复测定3次取其平均值。 1.4.2 滤纸片法对抑菌性质的研究 将保存大肠杆菌菌种反复转种2次备用。用无水乙醇与挥发油按照1：1的比例稀释后，再用无菌水依次稀释成浓度为7.5%、5%、2.5%、1.25%、0.625%，备用。分别用不同浓度的乙醇溶液为对照。将干净的滤纸制成直径大小为0.6cm的小圆纸片，灭菌后备用。然后制备菌悬液。在超净台里将转接后生长良好的菌种用接种环将其接种于lb固体培养基中，放入37℃温箱中，24小时后观察是否有菌落生长。贴片：在超净台里将平板划分6个或3区，用无菌水做对照组。每两张滤纸片为一帖，贴在平板的指定位置，轻摁一下使其牢固，倒置放入30℃培养箱中培养，24h后观察结果。 数据分析：利用上述观察结果参照菌丝生长法用直尺测量菌圈生长直径以无菌水做对照进行生长率的测定，计算公式： 生长率=（对照组菌落直径－给药组菌落直径）/对照组菌落直径×100% 抑制率=1-生长率 2 结果与分析 2.1 水蒸气法提取精油出油率 2.1.1 不同蒸馏时间对挥发油提取结果的影响 分别取经过阴干、粉碎、过40目筛后的样品50g，加水300ml，蒸馏时间分别是：60min；90min；120min；150min；180min；210min和240min。观察其结果并记录，其结果如表1： 由表1可知，当蒸馏时间为210分钟时出油率达到最大。 2.1.2 不同加水量对挥发油的提取结果 分别取经过阴干、粉碎、过40目筛后的样品50g，加水量依次分别为200ml；250ml；300ml，蒸馏时间为210min，按提取工艺流程提取，进行重复试验。观察结果并记录，提取结果如表2： 由表2可知，当投料量为50克时，加水量为5倍左右时出油率最高。 2.2不同稀释度薄荷挥发油对大肠杆菌的抑菌活性量效关系 2.2.1取一定量的薄荷挥发油，分别稀释成浓度为5%、2.5%、1.25%、0.625%、7.5%，进行重复试验，观察抑菌圈直径的大小并记录结果，见表3： 表3 不同挥发油浓度的抑菌圈直径 由表3可知抑菌圈的直径随挥发油浓度的增大而增大，在2.5%到5%之抑菌圈的直径增大的很明显，所以效果最好。 3 讨论 薄荷油是溶解于芳香植物的花，叶，枝，干，根和果实细胞液内通过蒸馏而得到的挥发油，通过上述实验表明，挥发油提取时，不同的外界因素，如提取过程中投料量、加水量、蒸馏时间等对挥发油的提取都有很大的影响，薄荷提取的最佳条件是加水量应为投料量的5倍左右，蒸馏时间为210分钟，这时出油量最多。从不同薄荷挥发油浓度对大肠杆菌的抑菌活性可看出，浓度越大，抑菌直径越大，在浓度达到2.5%到5%之间，抑菌圈的半径增大的很明显，所以效果最好。 参考文献 [1] 何坚，孙宝国.香料化学与工艺学[m].化学工业出版社， 1995，54-55. [2] 杨红主编.中药化学实用技术.第2版.北京：科学工业出版社，2005，32-38. 作者简介：王红涛（