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UV法测定蓝莓中黄酮含量 　　蓝莓（Blueberry）是杜鹃花科越橘属（Vaccinium）类灌木果树，其果实内含有丰富的花青素等物质，具有提高视力、抗衰老、防癌、治疗心血管和泌尿系统疾病等功效，被誉为“21世纪功能性保健浆果”和“花青素之王”，并被国际粮农组织（FAO）列为人类五大健康食品之一，近年来风靡欧美及日本等发达国家[1-5]。 　　研究发现蓝莓果实中富含花色苷、黄酮醇和黄烷醇等黄酮类物质，它们具有很高的生物活性，也是蓝莓发挥其特殊功效的主要物质，因此黄酮类物质含量和抗氧化能力已成为评价蓝莓果实品质的一个重要指标[6-9]。 　　本文对所选的几种蓝莓为实验对象，以UV法对其黄酮的含量进行测定，以期确定这些品种的品质。本方法简单易行，结果可靠。 　　1材料与方法 　　1.1仪器与设备 　　BS224S电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司） 　　756MC紫外可见分光光度计（上海菁华科技仪器有限公司） 　　SB-5200DTD超声波清洗机（宁波新芝生物科技股份有限公司）EYEL4N-1100旋转蒸发仪（上海爱朗仪器有限公司） 　　DLSB-5/20低温冷却液循环泵（郑州长城科工贸有限公司） 　　1.2试剂 　　甲醇分析纯500ml（天津市科密欧化学试剂有限公司） 　　磷酸分析纯500ml（天津市科密欧化学试剂有限公司） 　　乙酸乙酯分析纯500ml（天津市科密欧化学试剂有限公司） 　　硝酸铝分析纯500g（天津市科密欧化学试剂有限公司） 　　亚硝酸钠分析纯500g（天津市科密欧化学试剂有限公司） 　　氢氧化钠分析纯500g（天津市科密欧化学试剂有限公司） 　　盐酸分析纯 　　超纯水（自制） 　　1.3标准品 　　芦丁标准品（北京百灵威科技有限公司，CAS：153-18-4，Lot：L6B0M08） 　　1.4样品 　　蓝莓鲜果（大连森茂现代农业有限公司大连大学蓝莓研究所试验基地） 　　2.方法 　　2.1蓝莓样品制备[10-11] 　　称取在-20℃速冻蓝莓鲜果5g，采用正交实验设计考察最佳的提取溶剂、料液比、提取温度、提取时间和提取次数。确定提取条件为：破碎后按料液比1：15加入的80%甲醇，盐酸调节PH=1，超声提取30min，取滤渣按上述过程再提取一次，合并提取液。取滤液用旋转蒸发仪浓缩后加入5倍体积乙酸乙酯进行萃取，萃取三次，合并乙酸乙酯层溶液，回收乙酸乙酯，旋出物用甲醇定容至10ml容量瓶，保存备用。 　　2.2显色剂制备 　　精密称制成5%亚硝酸钠溶液，10%硝酸铝溶液，4%氢氧化钠溶液保存备用。 　　2.3标准溶液的配制 　　精密称取10.0000mg芦丁配制成浓度为0.2mg/ml溶液。 　　2.4标准曲线的建立 　　分别量取不同体积的上述标准液于10ml容量瓶中，用80%甲醇稀释至刻度。分别在上述溶液加入0.5ml5% NaNo2溶液，混匀放置6min，加入0.5ml10% Al（No3）3溶液，混匀放置6min。加入4.0ml4% NaOH溶液，加入3.0ml80%甲醇溶液，混匀放置15min。于最大波长处测定吸光度。 　　2.5最大吸收波长的确定 　　吸取芦丁标准溶液，显色，用紫外可见分光光度计在300～900nm范围内扫描，确定最大吸收波长。 　　2.6样品吸光度测定[12-14] 　　精确量取配制好蓝莓样品溶液按照2.4的方法于最大波长处测定吸光度。 　　3结果与分析 　　3.1最大吸收波长的选择 　　芦丁标准品与显色试剂反应后，在300～900nm波长处的扫描结果确定芦丁的最大吸收波长为500nm。 　　3.2标准曲线绘制 　　以吸光度为纵坐标，芦丁浓度为横坐标建立标准曲线如图1所示。 　　结果表明芦丁在0～0.5mg/ml浓度范围内吸光度具有良好的线性关系，线性回归方程为：Y=10.766x-0.0018（R2=0.9997）。 　　3.3蓝莓吸光度及黄酮含量 　　蓝莓吸光度及黄酮含量如表1所示 　　4结论与讨论 　　实验以芦丁为标准品，以NaNo2―Al（No3）3―NaOH为显色方法，测定了所选几种蓝莓品种的黄酮含量。确定了最大吸收波长为500nm。结果以芦丁含量比蓝莓鲜重表示。该方法简便、快速、准确，适于蓝莓黄酮的含量测定。 　　参考文献 　　[1]李炜.浅析中国蓝莓产业发展[J].中国野生植物资源，2013，32（5）：48-51. 　　[2]徐云，徐建，王婷婷功能性保健食品蓝莓的研究进展[J].食品研究与开发，2013，34（6）132-134. 　　[3]卜庆雁，周晏起.浅析蓝莓的营养保健功能及开发利用前景.北方园艺，2010（8）：：215-217. 　　[4]刘欢.“浆果之王”蓝毒的营养保健作用研究[J].中国新技术新产品，2009（19）：228. 　　[5]李金星，胡志