构建基因工程表达载体时.PPT

(1)一个图1所示的质粒分子经Sma Ⅰ切割前后，分别含有________个游离的磷酸基团。 (2)若对图中质粒进行改造，插入的Sam Ⅰ酶切位点越多，质粒的热稳定性越________。 (3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Sma Ⅰ切割，原因是________。 (4)与只使用EcoR Ⅰ相比较，使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止____________________。 (5)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入________酶。 (6)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了____________________________________。 (7)为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在________的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。 【解析】　环状DNA分子中磷酸全部参与形成磷酸二酯键，被Sma Ⅰ限制酶切开后相当于一个正常的DNA分子，每个DNA分子单链各含有一个游离的磷酸基团；A－T碱基对有两个氢键，而G－C碱基对有三个氢键，G－C碱基对含量越多，热稳定性越高；从图中读出：Sma Ⅰ限制酶破坏目的基因和标记基因；用Bam HⅠ和Hind Ⅲ两种不同的限制酶处理，形成不同的黏性末端，能有效防止只用一种限制