猪流感病毒(H亚型)ELISA抗体检测试剂盒等种 兽药产品质量标准、....docVIP

―PAGE \* MERGEFORMAT4―附件2（略）附件3猪流感病毒（H1亚型）ELISA抗体检测试剂盒等2种兽药产品质量标准、说明书和内包装标签一、猪流感病毒（H1亚型）ELISA抗体检测试剂盒质量标准、说明书和标签（一）猪流感病毒（H1亚型）ELISA抗体检测试剂盒质量标准猪流感病毒（H1亚型）ELISA抗体检测试剂盒Zhuliuganbingdu（H1 Yaxing）ELISA Kangtijiance ShijiheELISA Kit for Swine Influenza Virus（H1 Subtype）Antibody Detection本试剂盒系用H1亚型猪流感病毒血凝素（HA）基因的原核表达产物包被的酶联反应板、阴性对照血清、阳性对照血清、羊抗猪酶标二抗、样品稀释液、底物液A、底物液B、20倍浓缩洗涤液、终止液、血清稀释板等组装而成。用于检测H1亚型猪流感病毒血清抗体。【性状】 试剂盒的外包装应洁净、无破损，内包装应无破损、无裂痕、无渗漏，品名、批号、保存条件、有效期清晰。其中：猪流感病毒（H1亚型）ELISA抗原包被板 包装膜封闭良好，孔底清洁透明，无异物，96孔/块，2块/盒。猪流感病毒（H1亚型）阴性对照血清 淡黄或淡红色液体，无臭、无味，有时有少量悬浮物，装量为2ml/管，2管/盒。猪流感病毒（H1亚型）阳性对照血清 淡黄或淡红色液体，无臭、无味，有时有少量悬浮物，装量为2ml/管，2管/盒。羊抗猪酶标二抗 无色澄清液体，无臭、无味，无沉淀物，装量为20ml/瓶，1瓶/盒。样品稀释液 无色液体，无臭、无味，有时有少量沉淀物，装量为50ml/瓶，1瓶/盒。底物液A 无色澄清液体，无臭、无味，无沉淀物，装量为10ml/瓶，1瓶/盒。底物液B 无色澄清液体，无臭、无味，无沉淀物，装量为10ml/瓶，1瓶/盒。20倍浓缩洗涤液 无色澄清液体，无臭、无味，无沉淀物，装量为30ml/瓶，1瓶/盒。终止液 无色澄清液体，无臭、无味，无沉淀物，装量为10ml/瓶，1瓶/盒。血清稀释板 孔底清洁透明，无异物，96孔/块，2块/盒。【无菌检验】 按现行《中国兽药典》附录对阳性对照血清、阴性对照血清、羊抗猪酶标二抗进行检验，均应无菌生长。【敏感性检验】 将阳性质控血清（见附注1）按1:5、1:10、1:20、1:40、1:80、1:160、1:320、1:640进行2倍系列稀释后，分别取100μl加入抗原包被板各相应孔中，同时设阳性对照和阴性对照（不用稀释）各2孔，空白对照1孔，轻轻振匀孔中样品（勿溢出），置37℃下孵育30分钟。其余操作方法按“用法与判定”1.5.2～2阳性质控血清稀释倍数OD630nm值1:5≥P×0.25+1.11:10≥P×0.25+0.91:20≥P×0.25+0.71:40≥P×0.25+0.51:80≥P×0.25+0.31:160≥P×0.25+0.21:320≥P×0.25+0.11:640≥P×0.25注：P为试剂盒的两个阳性对照血清孔OD630nm的平均值。【特异性检验】 按照“用法与判定”对30份阴性质控血清（包括猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬、猪萎缩性鼻炎、猪传染性胸膜肺炎、副猪嗜血杆菌、猪口蹄疫、猪瘟、猪弓形虫、猪水疱性口炎、猪衣原体、猪流感病毒H3亚型、猪流感病毒H9亚型及大肠杆菌工程菌株免疫的阳性血清各2份，猪流感病毒H1亚型抗体阴性猪血清4份，见附注2）进行检测和判定，均应为阴性。【用法与判定】 1 用法1.1 样品准备 取动物全血，待血液凝固后，以4000r/min离心10分钟，收集上清。也可采集血液，待凝固后自然析出血清。要求血清清亮，无溶血。1.2 洗涤液配制 使用前，将20倍浓缩洗涤液恢复至室温（20～25℃），并摇动使沉淀溶解（最好在37℃水浴锅中加热5～10分钟），然后用蒸馏水作20倍稀释（例如：每两块板用30ml的20倍浓缩洗涤液加上570ml蒸馏水），混匀后即可使用。稀释好的洗涤液在2～8℃1.3 样品稀释 在血清稀释板中用样品稀释液按1:40的比例稀释待检血清（例如：195μl样品稀释液中加5μl待检血清）。1.4 对照不需要稀释，直接使用。 1.5 操作步骤1.5.1 取抗原包被板（根据样品多少，可拆开分次使用），先用洗涤液洗板1次，再将稀释好的待检血清取100μl加入到抗原包被板孔中。同时设2孔阴性对照、2孔阳性对照及1孔空白对照，轻轻振匀孔中样品（勿溢出），置37℃下孵育301.5.2 甩掉反应孔中的溶液，每孔用约200μl洗涤液洗涤5次，每次静置3分钟后倒掉洗涤液，并在干净的吸水纸上拍干。1.5.3 每个反应孔加羊抗猪酶标二抗100μl，置37℃下孵育301.5.4 洗涤5次，方法同1.