川芎嗪对蛛网膜下腔出血后血管痉挛防治作用的实验研究.pdf

四川大学华西临床医学院硕士学位论文 各组动物均全部存活。造模后按照预定时间麻醉固定，空白组、对照 组和实验组分别于造模后72H和168H取脑脊液和血浆的标本。血浆标本 从耳缘静脉抽取，取后立即离心(速度为2000转／分)，取上清液低温(一 80。)保存；脑脊液标本仍然从枕骨大孔间隙穿刺抽取，低温(--80。) 保存。 6．放射免疫法定量分析 6．1血浆和脑脊液中NO测定步骤： 空白管 标准管 测定管 双蒸水(m1) 0．1 100umol／L标准品 0．1 缸1) 样本(m1) O．1 试剂一(m1) 0．2 0．2 0．2 试剂二(m1) 0．2 0．2 0．2 混匀，37℃水浴60分钟 I试剂三(m1) 0．2 0．2 0．2 I试剂四(m1) 0．1 O．1 0．1 混匀30秒，3500转／分离心10分钟，取上清 I上清液(m1) 0．5 O．5 0．5 0．6 O．6 O．6 l No显色剂(m1) 混匀，静置10分钟，550rim，0．5cm光径，蒸馏水调零测各管吸光度值。 计算公式： NO(u,nol／L)=(样本管吸光度一空白管吸光度)／(标准管吸光度一空白管 吸光度)X标准品浓度(100umol／L) 8 四川大学华西临床医学院硕士学位论文 6．2血和脑脊液中ET测定步骤： 混匀，4℃，3000rpm离心10分钟，分离血浆。测定前，使样本置于室 温或冷水中水浴，再次4"C，3000rpm离心5分钟，取上清测定。 ETRIA加液程序(u1) T NSB so Si—S5 仇 U 缓冲液 200 100 i00 标准液 100 样品 i00 100 抗血清 100 100 100 摇匀4Y：24h 摇匀4X224h 混匀，室温放置20分钟，3500rpm离心25分钟，吸弃上清液，在r计 数器上测定沉淀cpm数。 7．神经系统功能评分 神经功能缺损评分标准：参照《现代药理实验方法学》评分，采用10 分制。①无神经功能损伤症状，动物正常活动，进食评0分；②将动物尾 巴提起后，前肢屈曲1分；③将动物放置平板上，向一侧转圈2分；④ 将动物放置平板上，用手轻推向一侧倾倒3分；⑤动物偏瘫，不能自发 行走、觅食等基本反射丧失4分。造模后72h，评分观分则表明模型成 功，低于2分则去除。各组于各时间窗对动物进行神经功能评分。 8．统计学分析 9 四川大学华西临床医学院硕士学位论文 空白组、对照组和实验组之间采用方差分析，若方差不齐，则采用秩 和检验，进行秩次转换后的方差分析，各组内72H和168H之间采用t检 验进行分析。神经功能评分采用t检验比较差异性。使用spssl2．0软件 包统计分析。 结果