微生物检验方法(实用版).docVIP

微生物检验作业实验要点 一、 产品采集（依据GB 15979—2002） 采集：于同一批号的三个运输包装中至少抽取12个最小销售包装样品，1/4样品用于检测，1/4样品用于留样，另1/2样品必要时用于复检。抽样的最小销售包装不应破裂，检验前不得启开。 备注：微生物检验耗时长，平常的微生物控制一般为中包时登记生产日期，进行取样培养。 二、 培养基的制备与灭菌 1．营养琼脂培养基 制备：称量6.6g营养琼脂培养基置于500ml三角烧瓶中，加入150ml蒸馏水，搅拌均匀后，用50ml蒸馏水将玻棒上残留冲洗入三角瓶中，测量其PH值，要求为7.2︿7.4，置于酒精灯上均匀加热至沸腾，加热期间需不停搅拌直至完全融化，加热时，要加石棉网防止过热糊底，烧焦及溢出，融化过程中，要不时的加热蒸馏水补足所蒸发的水分（事先在三角瓶上液面处作一处标记）。 灭菌：制作合适尺寸塞塞紧三角烧瓶，用干净牛皮纸包扎瓶口后置于高压蒸汽灭菌锅中，调节121℃高压灭菌15分钟备用。 2．沙氏琼脂培育基 制备：称量14.0g沙氏琼脂培养基置于500ml三角烧瓶中，加入150ml蒸馏水，搅拌均匀后，用50ml蒸馏水将玻棒上残留冲洗入三角瓶中，置于酒精灯上均匀加热至沸腾，加热期间需不停搅拌直至完全融化，加热时，要加石棉网防止过热糊底，烧焦及溢出，融化过程中，要不时的加热蒸馏水补足所蒸发的水分（事先在三角瓶上液面处作一标记）。 灭菌：制作合适尺寸棉塞塞紧三角烧瓶，用干净牛皮纸包扎瓶口置于高压蒸汽灭菌锅中，调节115℃高压灭菌15分钟。 3．乳糖胆盐发酵管 制备：称量3.5g乳糖胆盐发酵管置于250ml三角烧瓶中，加入80ml蒸馏水，搅拌均匀后，用20ml蒸馏水将玻棒上残留冲洗入三角瓶中，测量其PH值，要求为7.3-7.5。置于酒精灯上均匀加热至沸腾，加热期间需不停搅拌直至完全融化，加热时，要加石棉网防止过热糊底，烧焦及溢出，融化过程中，要不时的加热蒸馏水补足所蒸发的水分（事先在三角瓶上液面处作一处标记）。 分装：将发酵管培养基分装于20*200试管中约1/3处，分装5管，分别加入一个小导管后用棉塞塞紧。 灭菌：用牛皮纸包扎5管试管后用棉线系紧，在115℃下高压灭菌15分钟备用。 4．SCDLP液体培养基 制备：称量3.8gSCDLP液体培养基置于250ml三角烧瓶中，加入80ml蒸馏水，搅拌均匀后，用20ml蒸馏水将玻棒上残留冲洗入三角瓶中，测量其PH值，要求为7.2︿7.3。置于酒精灯上加热至沸腾，加热期间需不停搅拌直至完全融化，加热时，要加石棉网防止过热糊底，烧焦及溢出，融化过程中，要不时的加热蒸馏水补足所蒸发的水分（事先在三角瓶上液面处作一处标记）。 分装：将SCDLP液体培养基分装于20*200试管中约1/3处，分装9管，分装完毕用棉塞塞紧。 灭菌：用牛皮纸包扎9管试管后用棉线系紧，在121℃下高压灭菌20分钟备用。 5．葡萄糖肉汤培养基 制备：称量3g葡萄糖肉汤培养基置于250ml三角瓶中，加入80ml蒸馏水，搅拌均匀后，用20ml蒸馏水将玻棒上残留冲洗入三角瓶中，测量其PH值，要求7.2-7.4。置于酒精灯上均匀加热至沸腾，加热期间需不停搅拌直至完全融化，加热时，要加石棉网防止过热糊底，烧焦及溢出，融化过程中，要不时的加热蒸馏水补足所蒸发的水分（事先在三角瓶上液面处作一处标记）。 分装：将培养基分装于20*200试管中约1/3处，分装5管，分装完毕后用棉塞塞紧。 灭菌：用牛皮纸包扎5管试管后用棉线系紧，在121℃下高压灭菌15分钟备用。 6．血液琼脂培养基 制备：称量4.5g血液琼脂基置于250ml三角烧瓶中，加入80ml蒸馏水，搅拌均匀后，用20ml蒸馏水将玻棒上残留冲洗入三角瓶中，测量其PH值，要求为7.0-7.4。置于酒精灯上均匀加热至沸腾，加热期间需不停搅拌直至融化，加热时，需加石棉网防止过热糊底，烧焦及溢出，融化过程中，要不时的加热蒸馏水补足所蒸发的水分（事先在三角瓶上液面处作一处标记）。 分装：将培养基分装于5个培养皿中，每个约15-20ml培养基。 灭菌：将培养皿置于高压蒸汽灭菌锅中，调节121℃高压灭菌15分钟后取出冷却至50℃左右，以无菌操作吸取无菌脱纤维兔血2ml加入每个瓶皿，摇匀，制成平板，贴上标签，制冰箱内备用。 7．灭菌生理盐水的制备 取2.25gNaCl ( AR)加入500ml三角瓶中，再加入250ml蒸馏水，搅拌均匀后，塞上棉塞，用牛皮纸包扎好，放入121℃高压灭菌15分钟。 三、微生物检验步骤 1．用酒精棉球清洁超净台，把每个培养皿贴上标签，对于空白对照的培养皿贴上空白对照的标签； 2．将待测包装袋、培养基、灭菌生理盐水、灭菌三角瓶、移液管、洗耳球、镊子、酒精灯、酒精棉球、剪刀、电子称等实验操作必须用品置于超净工作台中，拉