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发酵法制γ-癸内酯 -----------第五期大学生科研训练计划（SRTP） 内容： 1.γ-癸内酯 1.1 什么是γ-癸内酯 1.2 γ-癸内酯的制备方法 1.3 γ-癸内酯的研究现状 2.发酵法制γ-癸内酯 2.1 实验原理 2.2 实验材料、试剂与仪器 2.3 实验过程及方法 2.4 实验结果 2.5 数据分析与讨论 3.结论及感想 1. γ-癸内酯 1.1 什么是γ-癸内酯 ？ 含有五元内酯环的十碳化合物 分子量：170.25；分子式： ；相对密度：0．946；折光指数n：1．452；沸点130～135℃／ 5mmHg；闪点158℃ 性质：无色～淡黄色的略微粘稠的液体，不溶于水，可溶于乙醇、油脂 天然存在于桃子、草莓、椰子、芒果、杏、啤酒、朗姆酒 ,也存在于乳制品的风味物质中 ,已在 120多种食物的香气成分中发现了这种化合物 γ-癸内酯具有强烈的果香和奶油香气,稀释时有桃子香气 1.2γ-癸内酯的制备方法： 微生物发酵法：解脂假丝酵母菌 化学合成方法：由烯烃作原料 1.3γ- 癸内酯的现状 ： 内酯类香料是香料家族中成员最少的一类，而且在自然界中存在很少，内酯类香料的香气一般较为高雅，适宜调配各种香精。内酯类与酯类在香气特征上有相似之处，即均具有突出的果香香气，广泛用于配制食用香精和日用香精，并用作合成香料、药物和农药的中间体以及聚合物和共聚物用溶剂等。 2.发酵法制γ-癸内酯 2.1实验原理： 蓖麻油酸甲酯合成 γ- 癸内酯： 解脂假丝酵母菌 （Yarrowia lipolytica AS2.1405），对于甘油酯和烷烃类物质有很强的代谢能力，是工业上应用较为广泛的一种菌种。蓖麻油来源丰富，且价格低廉，蓖麻油中含有的大量蓖麻油酸(顺式 - 12- 羟基 - 十八碳 - 9- 烯酸)是 γ- 癸内酯的转化前体，在转化过程中 R(＋)- 蓖麻油酸的手性中心传递到 γ- 癸内酯上，且蓖麻油同时也可作为微生物生长的碳源，是生物法制备天然香料γ- 癸内酯的理想原料。通过改进发酵工艺，控制代谢途径等手段来提高 Yarrowia lipolytica AS2.1405代谢蓖麻油生物合成内酯的效率，使 γ- 癸内酯的发酵制备最终达到工业化生产要求，对于我国天然香料产业的发展有着巨大的推动作用。 2.2实验材料、试剂与仪器： 实验用菌株：解脂假丝酵母（yarrowia lipolytica） 主要实验试剂：γ-癸内酯标准品、酵母膏、蛋白胨、磷酸二氢钾、七水合硫酸镁、磷酸氢二钠、吐温80、葡萄糖、蓖麻油 主要实验仪器：无菌操作台、高压锅、气象色谱仪、阿贝折射仪、HYG加回转式恒温调速药瓶柜、离心机 实验中所需培养基的配制： 种子培养基： 葡萄糖 15.00g/l 蛋白胨 2.50 g/l 磷酸二氢钾 0.50 g/l MgSO4.7H2O 2.40g/l 磷酸氢二钠 1.20g/l 吐温80 4.00 g/l 酵母膏 2.50 g/l 发酵培养基： 葡萄糖 15.00g/l 蛋白胨 2.50 g/l 磷酸二氢钾 0.50 g/l MgSO4.7H2O 2.40g/l 磷酸氢二钠 1.20g/l 吐温80 4.00 g/l 蓖麻油 50.00 g/l 酵母膏 2.50 g/l 2.3实验过程及方法： Ⅰ.菌种培养： (1).配制培养基： 配置菌种培养基500ml，pH 调至6.5。 将菌种培养基500ml分装于三个150ml锥形瓶内，用棉花报纸封装好，标记①②③，放置在高压锅内灭菌（121 ℃，0.1mp,20 min）。 将灭菌后的种子培养基置于 30 ℃培养箱培养 24 h ，以便查看是否灭菌完全。 (2).培养过程： 24h后，观察培养基仍澄清、无浑浊现象，则未染菌，实验可继续进行。 在无菌操作台上接种（