虹鳟脑型肌酸激酶基因cDNA全长的克隆与序列分析.docVIP

虹鳟脑型肌酸激酶基因cDNA全长的克隆与序列分析第18卷第4期2009年7月上海海洋大学JOURNALOFSHANGHAIOCEANUNIVERSITYVo1.18.No.4July,2009文章编号:1674—5566(2009)04—0385～06虹鳟脑型肌酸激酶基因cDNA全长的克隆与序列分析王家庆,李代宗,郭冉,张辉,宋波澜,王志平,钟尉方(1.河北农业大学海洋学院,河北秦皇岛0660032.暨南大学水生生物研究所,广东广州510632)摘要:肌酸激酶(Creatinekinase,CK)能够催化磷酸基团在二磷酸腺苷(ADP)和磷酸肌酸间的可逆性转移,在细胞能量代谢过程中发挥重要作用.以虹鳟(Oncorhynchnsmykiss)为研究材料,使用RT—PCR和RACE法分离和克隆了虹鳟脑型肌酸激酶(c^)基因cDNA的全长序列(GenBank登录号:FJ548753).序列全长1493bp,其中5端非翻译区81bp,3端非翻译区266bp,开放性阅读框1146bp,编码381个氨基酸.虹鳟鱼CKB蛋白存在两个重要功能结构域,分别为EF—hand结构域和ATP:guanido磷酸转移酶结构域.构建的系统进化树证实所克隆的肌酸激酶CK基因属于脑型肌酸激酶基因CKB.虹鳟鱼CKB蛋白序列与大西洋鲑(Salmosalar)的CKB在进化树上最先聚为一支,这与两者同属鲑科鱼类这一事实是一致的.虹鳟鱼CKB蛋白序列与大西洋鲑的CKB蛋白同源性高达99%,与已报道的哺乳动物的CKB蛋白同源性均在80%以上相符,表明CKB基因在进化过程中是高度保守的,在细胞能量发生与转移过程中发挥着重要作用.关键词:虹鳟鱼;肌酸激酶基因;RT—PCR;RACE中图分类号:S917文献标识码:AThecloningandanalysisofCKBfulllengthcDNAderivedfromOncorhynchusmykissWANGJia—qing,LIDai.zong,GUORan,ZHANGHui,SONGBo—lan,WANGZhi—ping,ZHONGWei—fang(1.CollegeofOcean,HebeiAgricultureUniversity,Qinhuangdao066003,China;2.AquaticResearchInstitute,JinanUnwe~ity,Guangzhou510632,China)Abstract:ATPlevelsinvertebratecellsarelargelyregulatedbycreatinekinase(EC2.7.3.2)thatreversiblycatalyzethetransferofphosphatebetweenATPandvariousphosphogens.Inthispaper,RT—PCRandRACE(RapidAmplificationofcDNAEnds)methodswereusedfortheisolationofthefulllengthcDNAofCKBgene(GenBankaccessionnumber:FJ548753)frombrainofOneorhynehusmykiss.Sequenceanalysisrevealeda1493bpcDNAcontainingthe81bp5untranslatedregion,266bp3一untranslatedregionand1146bpopenreadingframeencoding381aminoacids.O.mykissCKBhastwoimportantproteinfunctiondomains,namely,EF—handdomainandATP:guanidophosphotransferasedomain.Evolutionarytreeofalltypesof收稿日期:2008—12—18基金项目:河北省科技厅项目(0724240011)作者简介:王家庆(1981一),男,辽宁海城人,讲师,主要从事海洋动物分子生物学及生物信息学方面的研究.E—mail:jiaqing5212@163.con,Fax:0335—3152206,Tel:0335—3150004386上海海洋大学18卷creatinekinaseswasthenconstructed.anditwasdeterminedthatthiscDNAofO.mykisscreatinekinasefrombrainbelongedtobraintypeCK.CKBproteinofO.mykissandCKBproteinofS.salarfirstclusteredintoabranch,becausethey