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三七皂甙对无糖培养引起SK—N—SH细胞损伤的保护作用实验研究 三七皂甙对无糖培养引起SK.N.SH 细胞损伤的保护作用 PreventingEffectsofINS0nSK?N-SHCell~lnllageInducedbyGlycoprivaiCulture 复旦大学医学院生物教研室 BiologicalTeachingSeeti~.MedlcalSeh,xdofFudmlUI (上海200032) 刘雯是青锋李华左忸 uwenⅫQifLIHuaZUOJj 摘要:采用SK-N.sH细胞无糖培养方法.建立神经细胞能量代谢障碍模型.通过细胞学,形态 学与脂质过氧化损伤指标的检测,观察中药三七皂甙(s)对模型细胞的保护作用鲒果:无糖培 养下细胞皱缩,形态不完整,用药詹细胞形态正常,神经细胞存活数增加,细胞凋亡率降低;妇胞脂 质过氧化损伤减轻.表明三七皂甙对能量代谢障碍引起的神经细胞损档有保护作用.这一砟用可 能与其抗脂质过氧化损惦有关: 关键词:三七皂甙(PNS);sH.SH;能量代谢障碍;脂质过氧化 中围分类号:R282.7105文献标识码:A文章编号:1007—1334(20o2)02—0o46—04 细胞能量代谢障碍是各种脑缺血疾病共同的病理生理 改变,是引起神经细胞损伤的主要原因’_1.脂质过氧化作用 可能是引起损伤的主要机制之一.本文以SK-~SH细胞 无糖培养为模型,观察能量代谢障碍引起的神经细胞损伤. 以及三七皂甙(PNS)对细胞损伤的保护作用和抗脂质过氧化 作用. 一 ,材料与方法 1材料 SK-N.SH细胞株购自中科院上海细胞所;RPMIt6d0培 养基及无糖DMEM培养基均为Gibco公司产品,牛血清购 自公司;噻唑 (3)分组与用药将培养细胞分为正常组,模型组和各 ? 46? 用药组.培养细胞生长至铺满培养瓶壁后.分别换?0 培养液,无糖培养液和各浓度确s药液,培养24h (4)形态观察光镜及透射电镜下观察各组细胞形态一 (5)细胞学检测①存活数检测将传代细胞I× l06个/ml浓度接种于96孔培养板中,细胞生长至单层时,分 另换1640培养液,无糖培养液,各浓度PNS药液每组4复 孔,作用24h后加入Mrr溶液l0吁L,作用4h后酸性异丙 醇溶解复孔内结晶,于Mu 含量以I州法测定.. =,结果 1.细胞学检测结果 (1)细胞存话牢 模型组sK细胞培养24h后,值明显低于正常组 , 加APNS后则有改善.并具有一定的量效关系(见表1). (2)细胞凋亡率 sK细胞无糖培养24h后,细胞揭亡率明显上升.加PINS 培养的细胞揭亡率比无糖培养的细胞明显下降(见表2). 表1无糖培养覆PINS对SK-N-SH细胞 存活的影响(n=4,i±s.下同) 组别OD值 正常组 模型组 0.01mg,/mlPNS组 0ozm/~aPNS组 0lmPNS组 0.4m/m1PNS组 0S~/ml组 0726±0099.. 0289±0079 05Il±0l28.. 0534±0132’ 0747±0086 060l±0152 0B昕±0l87 注:与模型组相比*Plt;0.05.**Plt;0.OI(下同). 裹2无糖培养覆PNS对细胞凋亡率的影响 组别细胞调亡辜(%) 正常组 模型组 0.I,~mlPNS组 08,~mlPNS组 0.55±0.27’ 26.76±529 11.79±2吕6’ 1.90±0.5l. 2.形态学结果 培养于l640培养液中正常sK细胞.光镜下可见细胞铺 满瓶底.细胞轮廓清晰呈搜形.有伪足,细胞质均匀透亮;培 养于无糖培养液中sK细胞.细胞量少,细胞皱缩.形态不完 整.有不少颗粒状物质;培养于含O.8mg/~aPNS的无糖培养 液内的SK细胞.形态与正常细胞相似(图1～3).电镜下培 养于1640培养液中正常SK细胞,细胞形态清晰,结构完整: 培养于无糖培养液中sK细胞,细胞染色质浓缩组细胞内的MDA含量与SOD活性也分 别有下降与升高趋势(见表3). (2)GSH含量及GSI+PX活性的检测 细胞外GSH含量与GSC-PX活性各组间役有显着差别. 模型组细胞内GsH含量与GsHnPx活性明显下降.添加P.NS 后GSH量,0.8mg/~aPINS组GSHoPX活性明显上升.0.1mg/ 组有升高趋势(见表4). 裹3无糖培养覆PINS对MDA,SOD的影响 三,讨论 细胞能量代谢障碍,是脑缺血性病变时引起神经细胞损 伤的重要原因之一[.脑能量代谢异常会影响到大脑的学 上海中医药杂志2O02年第2期 习,记忆,认知等行为.在脑缺血疾病研究中,缺血性脑损 伤的细胞模型也已成为研究缺血性损伤分子机制的重要工 具_6_.我们曾利用SK-N-SH细胞系建立缺血性损伤体外模 型.本实验采用这一方法观察能量